Скл - смешанная культура лимфоцитов. Совпадение по HLA. Иммунизация лимфоцитами (ЛИТ). Иммунологический фактор при невынашивании беременности

СКЛ (смешанная культура лимфоцитов) - это тест, позволяющий определить степень распознавания иммунными системами супругов антигенов тканевой совместимости друг друга.

Один из видов клеток крови, лимфоциты — являются основой иммунной системы. При этом среди клеток лейкоцитов существует некая иерархия, есть главные клетки, есть подчиненные, из которых каждая выполняет свою функцию.

При встрече лимфоцита с любыми чужеродными для организма объектами (клетками другого организма, вирусами, бактериями, и т. д.), то развивается иммунный ответ. Степень силы иммунного ответа будет зависеть от сходства структуры антигенов тканевой совместимости (HLA- антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов-потомков одной клетки, при этом это клетки, строго специализированные к конкретным чужеродным факторам, на которые необходим ответ. Иначе говоря, реакция иммунных клеток на что-то выражается том, что они начинают делиться. Деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем интенсивнее делятся клетки, тем их больше, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Интенсивность образования ДНК можно выявить путем включения в культуру клеток радиоактивного нуклеотида одного из «кирпичиков» ДНК, тимидина. Именно так и производится оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это можно сделать так. У обоих супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты, которые затем помещают в благоприятную для деления питательную среду. При смешении лимфоцитов разных людей, они начинают друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность образования ДНК в смешанной культуре разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек на другого конкретного человека, потому что "воевать" начинают клетки всех тех людей, лимфоциты которых помещены в среду.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным их деление. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В таком случае вся активность клеток в культуре будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и лишенных способности активно действовать клеток, можно получить необходимую информацию о степени иммунологического сходства супругов.

Анализ предполагает исследование 12-ти различных культур, оценка реакции в которых проводится на 3-и и 5-е сутки.

В результате получают 24 цифры, дающие информацию о реакции конкретной женщины на антигены тканевой совместимости мужа в процессе имплантации и во время беременности.

Не только иммунное отторжение, но и иммунная защита беременности - активный процесс. Для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно правильное иммунологическое распознавание ДНК мужа, содержащихся в зародыше. Если это распознавание вялое, медленное, происходит слишком поздно, тогда зародыш атакуется естественными клетками-киллерами матери и погибает.

Анализ СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа исправления ситуации. Поэтому после иммунизации анализ на СКЛ приходится повторять.

Совместное культивирование лимфоцитов, имеющих молекулы МНС-II разного гаплотипа, вызывает их бласттрансформацию и пролиферацию. Реагирующие клетки относятся к Т-лимфоцитам и стимулируются чужеродными MHC-II детерминантами, расположенными на В-лимфоцитах, макрофагах. Сила реакции зависит от степени различия между антигенами гистосовместимости. Для оценки реактивности индивидуума в отношении аллельного варианта МНС готовят однонаправленную культуру лимфоцитов. Для этого клетки-стимуляторы предварительно обрабатывают митомицином или облучают, при этом стимулирующие клетки теряют способность к делению, но сохраняют жизнеспособность.

Реактивность в смешанной культуре лимфоцитов является од-ним из критериев в оценке клеточного иммунитета. СКЛ позволяет провести типирование HLA, подобрать пару донор-реципиент при трансплантациях тканей и органов, провести корреляцию между HLA-антигенами и определенными заболеваниями.

Для постановки реакции используют взвесь лимфоцитов, выделенных из крови пациентов (донора и реципиента). Отмытые отвечающие клетки суспендируют в небольшом количестве среды 199 (0,5 мл) и после подсчета количества клеток доводят до 0,6 * 10 6 клеток/мл. Суспензию стимулирующих клеток приготовят аналогично с добавлением раствор митомицина С (500 мкг митомицина С в 1 мл забуференного физраствора) из расчета 0,1 мл на 1 мл суспензии. Клеточную смесь инкубируют 40 минут при 37 °С на водяной бане, помешивая, затем к суспензии добавляют холодную среду 199 и трижды отмывают клетки при центрифунировании. Осадок суспендируют в питательной среде культивирования, доводя количество клеток до 0,6 * 10 6 клеток/мл.

В лунки стерильного круглодонного иммунологического планшета внесят по 0,1 мл клеточной суспензии в растворе Хенкса и добавляют 0,1 мл клеточной суспензии, несущей аллельные варианты МНС. В контроль добавляют такое же количество раствора Хенкса.

Учет результатов проводят после инкубировать клеток при 37 °С 3-5 суток в зависимости от постановки реакции с использованием морфологического или изотопного метода (см. РБТЛ).

При трансплантации костного мозга выбор гистосовместимого донора проводится по результатам HLA-типирования донора и реципиента, а также при определении совместимости отобранных HLA-идентичных пар донор-реципиент в СКЛ, которая является финальным этапом оценки совместимости. Для этого используется постановка двунаправленной реакции СКЛ с использованием культурального микрометода в 96-луночной планшете с оценкой величины пролиферации по включению радиоактивного Н 3 -тимидина в ДНК пролиферирующих лимфоцитов.

Первые сообщения о смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ) появились в 1964 г. в связи с феноменом бластрансформации. Изучение СКЛ основано на том же принципе, что и реакции бласттрансформации лимфоцитов (см. раздел «Реакция бласттрансформации лимфоцитов »). Сила реакции зависит от степени различия между антигенами гистосовместимости. HLA-A, -В-В- и -С-антигены на поверхности лимфоцитов соответствуют HLA-D-антигенам, которые могут быть выявлены только при помощи СКЛ. В то же время DR-антигены (D-related) могут быть обнаружены при помощи антисывороток (см. раздел «Комплементзависимая цитотоксичность. Типирование по HLA-DR.»). Гипотеза о том, что анти-DR-сыворотки позволяют осуществлять тонкое типирование всего локуса D, кажется в настоящее время менее вероятной, чем гипотеза о существовании двух различных локусов.

Хромосома 6 человека с HLA-комплексом и близко расположенными локусами (GLO; PGM 3).

В настоящее время точно установлено существование 12 антигенов DW и 10 антигенов OR. LD - 2 = минорный D-локус, существование которого можно предположить на основании рекомбинационного анализа

Даже для Iа-антигенов человека в настоящее время обсуждается трехлокусная модель, так что термин «DR» не следует более применять в качестве синонима понятия «человеческие молекулы II класса».

Для оценки реактивности (индивидуума) в отношении аллогенного раздражителя готовят так называемую одностороннюю СКЛ, при которой для стимуляции используют инактивированные клетки. Следует заметить, что даже инактивированные стимулирующие клетки (см. ниже) обладают способностью выделять митогенные факторы, а также до некоторой степени усиливать синтез ДНК и биосинтез иммуноглобулинов. Это может стать скрытым источником ошибок. На мышиной модели хорошо изучены взаимодействия, возникающие в ходе аллогенной реакции.

Механизм индукции аллогенной реакции для получения эффекта зависимого от клеток лимфоцитолиза (модификация описана в соответствующей работе)

MF - макрофаг; T lNDH -индуктор хелперных клеток; Т н - Т-хелпер; рТ с - предшественник цитотоксической клетки; Т с - цитотоксическая клетка; треугольник- DR-антиген; прямоугольник - HLA-A/B-антигены

Правда, до настоящего времени остается неясным, какие типы клеток участвуют в пролиферативном ответе. Исследование первичной реакции лимфоцитов на аллогенные клетки используется в следующих случаях:

Проверка СКЛ-реактивности в качестве критерия оценки клеточного иммунитета;

Типирование HLA-D;

Выяснение взаимозависимости между HLA-D-антигенами и предрасположенностью к определенным заболеваниям;

Выбор пары донор - реципиент.

СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.Лимфоцит - центральная клетка иммунной системы.Что такое СКЛ?И. И. Гузов, к. м. н., гл. врач Центра иммунологии и репродукции СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.Лимфоцит - центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК - тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина - «кирпичика» ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры.Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.Дело в том, что сохранение беременности - активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции.Поэтому при обнаружении «плохой» конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.Использование СКЛ, которое было начато в нашем центре с весны 2000 г., позволило значительно улучшить качество лечение пациенток с бесплодием, невынашиванием беременности и неудачными попытками IVF.

СКЛ - смешанная культура лимфоцитов - MLC - mixed lymphocyte culture. Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит - центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

В ЦИР вы можете пройти обследование по СКЛ

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК - тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина - "кирпичика" ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что "в бой" вступают клетки всех участников смешанной культуры.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.

Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности - активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

Использование СКЛ, которое было начато в нашем центре с весны 2000 г., позволило значительно улучшить качество лечение пациенток с бесплодием, невынашиванием беременности и неудачными попытками IVF.