Антигены групп крови

1. Трансмембранные транспортеры (аг системы колтон – это аквапорин, т.е. транспортер воды; кидд – переносчик мочевины)

3. Рецепторы и молекулы клеточной адгезии

4. Ферменты (аг системы келл и др.)

5. Структурные белки (аг систем mns, гербих – гликофорины, содержащие большое количество сиаловых кислот, обеспечивающих отрицательный заряд эритроцитов)

Антигены эритроцитов:

1. гетерофильные антигены, встречающиеся у многих видов животных и бактерий;

2. неспецифические, или видовые антигены, не встречающиеся у других видов животных; но содержащиеся в эритроцитах всех людей;

3. специфические, или групповые антигены – изоантигены, содержащиеся на эритроцитах одних индивидуумов и отсутствующие у других. В трансфузиологии наибольшее значение имеют системы АВО и Rh.

Кровь каждого человека принадлежит к какой-либо одной из 4 групп системы АВ0 в зависимости от наличия на эритроцитах антигенов А и В и соответствующих им естественных антител-агглютининов анти-А и анти-В к отсутствующему антигену.

Различают: 0 (I); 0A, АА (II); 0B, ВВ (III); AB (IV)

Существует несколько видов антигенов А - А1, А2, А3, А4 и антигена В: В1, Вх, В3 и др. При этом интенсивность реакций с соответствующими анти-А или анти-В антителами прогрессивно снижается от каждого предыдущего к последующему. Так антиген А2 реагирует слабее, чем А1 и т.д. Среди лиц с группой крови А(II) частота выявления аг А1 составляет 80% наблюдений, для А2 – 15%, остальные варианты встречаются значительно реже. При этом примерно 1-8% лиц с группой крови А2(II) и 25-35% людей с группой А2В(IY) содержат в крови (избыточные) антитела А1, которые могут иметь естественное или иммунное происхождение. Иммунные антитела к антигенам эритроцитов могут образовываться при гемотрансфузиях. Это создает трудности при идентификации групп крови, выявляется в пробе на индивидуальную совместимость и требует подтверждения специальными моноклональными реагентами.

Людям, имеющим антитела против антигенов А и В нельзя переливать кровь лиц с соответствующими антигенами. Так, реципиентам с I группой крови нельзя переливать кровь людей других групп, кроме O (I). Групповые антигены отличаются высокой стабильностью. Они обнаруживаются в египетских мумиях, изготовленных до нашей эры.

Не менее важна в трансфузиологии система антигенов резус-фактора. Система резус Rh антиген был открыт Ландштейнером и Винером в 1940г. Главное отличие системы резус от системы АВО заключается в том, что кровь человека содержит только агглютиногены при полном отсутствии антител, подобных альфа- и бета-агглютининам системы АВО. Различают 5 основных аг этой системы: D(RhO), C(rh’), c(hr’), E(rh), e(hr). Эти антигены, находясь на эритроцитах в различных сочетаниях образуют 27 групп системы резус.

Антиген Rho(D) - основной в системе резус, он содержится в эритроцитах 85% людей, у остальных 15% он отсутствует. Это характерно для европейцев. У монголоидной расы он содержится у 95%. В норме Rh-антител в сыворотке нет, они возникают во время беременности или в результате переливания крови резус-положительной крови резус-отрицательному пациенту. Последствиями сенсибилизации по резус-фактору у беременной женщины является рождение детей с гемолитической болезнью или внутриутробная гибель плода. Если же пациенту, в крови которого содержатся такие антитела, переливается резус-положительная кровь возникает резус-конфликт с гемолизом переливаемых эритроцитов. Поэтому Rh (отр) пациентам можно переливать только Rh (отр) кровь. Кроме того, D-антиген имеет слабые варианты, которые объединяются в группу D(week) или D(u). Частота этих вариантов не превышает 1%. Доноры, имеющие эти антигены, должны рассматриваться как резус-положительные, поскольку переливание их крови резус-отрицательным пациентам может вести к сенсибилизации, а у сенсибилизированных вызывать тяжелые трансфузионные реакции. Но, реципиенты, у которых имеется антиген D(u) должны рассматриваться, как резус-отрицательные, и им можно переливать только резус-отрицательную кровь, т.к. нормальный D антиген может приводить к сенсибилизации пациента с развитием конфликта как у резус-отрицательных лиц.

Эритроцитарные антигены резус-системы Келл, Кидд, Даффи и др. сравнительно редко ведут к сенсибилизации и приобретают практическую значимость при многократных гемотрансфузиях и повторных беременностях

Между организмом Rh-отрицательной матери, не содержащей Д антигены и резус-положительного плода, содержащего этот антиген, приводящие к гемолитической болезни плода.

Если у Rh (отр.) женщины плод наследовал Rh (+) отца, его антигены могут поступать через плаценту в организм матери, где индуцируют синтез Rh-антител, которые проникают через плаценту плода и вызывают разрушение его эритроцитов - гемолитическая анемия плода.

При беременности Rh-антигены проникают в организм матери лишь в небольшом количестве и высоких титров специф. антител не образуют, поэтому при первой беременности у Rh(отр) матери конфликта не бывает. Исключение: инфекция, повышение проницаемости плаценты.

Т.к. Rh-антигены проникают в организм матери в основном при родах, то каждой последующей беременности количество антител нарастает - резус-конфликт.

Для предотвращения резус конфликта Rh(отр) женщинам перед родами вводят сыворотку, блокирующую Rh-антигены и отменяющих продукцию анти-резусных антител.

Rh- конфликт может возникнуть и при переливании крови, если Rh(отр) пациенту перелить Rh(+) кровь - синтез а/рез. антител и при повторных переливаниях - резус-конфликт.

Метод агглютинации в геле для определения антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител

Введение

Гелевая технология в микропробирках (ГТМ) была предложена Y. Lapierre в 1989 г. Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом геле "сефадекс", помещенном в микропробирки. Обычно система представляет собой пластиковые карты, содержащие микропробирки, заполненные гелем (патент DiaMed AG, Швейцария). Иммуногематологические исследования, основанные на реакции гемагглютинации, обычно проводятся в жидкофазных системах.

Одним из наиболее важных условий получения корректных данных реакции агглютинации является оценка результата. Слабая реакция может быть неверно интерпретирована, особенно неопытным персоналом. Ложные слабые или отрицательные результаты непрямого антиглобулинового теста могут иметь место за счет нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки вследствие недостаточно эффективного отмывания эритроцитов. Неадекватное перемешивание эритроцитов и элюция слабофиксированных антител в процессе отмывания могут стать причиной ошибок при проведении непрямого антиглобулинового теста.

Методика агглютинации в геле была разработана с целью стандартизации реакций гемагглютинации и получения достоверных результатов. Гелевая технология предусматривает разделение эритроцитов при центрифугировании, при этом неагглютинированные эритроциты проходят через гель и оседают на дне пробирок (отрицательный результат), в то время как агглютинированные задерживаются на поверхности или в толще геля (положительный результат). Центрифугирование в геле может быть конечной фазой любых серологических исследований, основанных на реакции гемагглютинации, кроме методов, требующих диспергирования для оценки результата.

Диапазон выполняемых тестов включает в себя определение фенотипа эритроцитов (включая слабые варианты антигенов), антиглобулиновый тест, скрининг и идентификацию антител, тесты на совместимость и некоторые другие.

Принцип гелевого теста

Забуференный декстрановый гель Sephadex ТМ G 100 superline может быть как нейтральным, так и содержащим специфические антисыворотки или антиглобулиновый реагент на гелевом матриксе. На гель наносятся эритроциты или смесь эритроцитов и сыворотки. Клетки всегда вносятся перед сыворотками - в отличие от стандартных серологических методик - с тем, чтобы тестируемые сыворотки не контактировали с гелем, что особенно важно при проведении антиглобулинового теста. После инкубации следует центрифугирование в строго определенном режиме. Если условия центрифугирования не выполняются (центрифугирование недостаточно длительное или слишком мягкое) могут иметь место ложноположительные результаты. Ложноотрицательные результаты также могут иметь место при нарушении условий (форсировании) центрифугирования. Использование автоматической ID-центрифуги (ДиаМед) устраняет эти проблемы. Для проведения тестов обычно используются три вида геля:

1. нейтральный, не содержащий специфических антител (применяется для поиска и идентификации антител солевым, и ферментным методами, холодовой стадии пробы на совместимость крови донора и реципиента);
2. специфический, содержащий антитела (моноклональные или поликлональные) к антигенам эритроцитов крови человека (применяется для типирования антигенов эритроцитов систем АВО, Резус, Келл и т.д.)
3. антиглобулиновый, содержащий антитела (полиспецифические или моноспецифические) к иммуноглобулинам человека и компонентам системы комплемента (применяется для прямого и непрямого антиглобулинового теста (реакции Кумбса) при поиске и идентификации ауто- и аллоиммунных антител, пробе на совместимость крови донора и реципиента).

Исследуемая кровь добавляется в верхнюю часть микропробирок диагностических карт, и при центрифугировании осуществляется разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов следующим образом: неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета - отрицательный результат; агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще - положительный результат.

Фиксированная агглютинация в геле позволяет легко оценивать результат реакции, а наличие контрольной микропробирки в диагностической карте подтверждает достоверность полученных данных.

В зависимости от силы реакции агглютинации в гелевой среде принята следующая оценка полученных результатов:

• сильноположительный (++++) - образовавшиеся агглютинаты эритроцитов задержались на поверхности геля;
• положительный (+++) - агглютинаты располагаются в верхней трети столбика геля;
• слабоположительный (++) - агглютинаты фиксированы в верхних двух третях геля;
• очень слабоположительный (+) - агглютинаты располагаются в нижней трети геля;
• отрицательный (-) - эритроциты формируют на дне микропробирки компактный осадок.

Оборудование и реактивы

• ID-карты для определения антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител;
• ID-центрифуга для центрифугирования карт;
• термостат на +37°С;
• штатив для пробирок и карт;
• пробирки вместимостью 5 и 10 мл;
• пипетки полуавтоматические одноканальные (10, 25, 50 мкл);
• перчатки резиновые хирургические;
• раствор для разведения 1 (раствор бромелина);
• раствор для разведения 2 (раствор низкой ионной силы - LISS, РНИС);
• 0,9% раствор хлорида натрия;
• стандартные типированные эритроциты человека для выявления антител и проведения перекрестной реакции.

Характеристика идентификационных карт

Идентификационные карты (ID-карты) Диа-Мед представляют собой пластиковые карточки, в которые встроено по шесть микропробирок. В пяти пробирках содержится смесь геля и антисывороток. Каждая карточка имеет шестую контрольную пробирку, содержащую нейтральный гель без антител (сtl). Маркировка пробирок в ID-карте осуществляется по выявляемым антигенам, например: А-В-АВ-D-СDЕ-сtl или С-с-Е-е-К-ctl. Идентификационные карты для выявления антител к антигенам эритроцитов имеют некоторые отличия, например, карты "Coombs / Enzyme Test": в трех пробирках, расположенных слева, содержится гель, содержащий антитела к глобулинам человека (моноспецифические анти-IgD или полиспецифические - к иммуноглобулинам различных классов) - реакция Кумбса. В следующих трех пробирках содержится только нейтральный гель, предназначенный для выявления антител к антигенам эритроцитов в солевой среде.

Общие правила использования идентификационных карт

1. Идентификационные карты должны храниться в сухом, защищенном от света месте при температуре 18-25°С. Срок годности указан в паспортной части каждой карты и на упаковочных коробках.
2. Растворы для приготовления суспензии эритроцитов, а также стандартные сыворотки и стандартные ID-эритроциты, использующиеся в отдельных исследованиях, должны храниться в сухом, защищенном от света месте при температуре 2-8°С. Срок годности указан на этикетке каждого флакона и упаковочной коробке.
3. Во избежание получения ложных результатов исследований, запрещается использование любых реагентов и карт с истекшими сроками годности, а также высохших, содержащих пузырьки газа или при повреждении оболочки.
4. Заготовка крови осуществляется с применением современных флеботомических методик, а также пригодна артериальная, капиллярная и пуповинная (без отмывания) кровь. Для исследований пригодны как образцы цельной крови (взятые в чистую, сухую пробирку), так и образцы крови, взятые на консервантах и стабилизаторах.

Типирование антигенов эритроцитов

ID-карты ДиаМед предназначены для одновременного определения группы крови по системе АВО и резус-принадлежности эритроцитов доноров и реципиентов (включая их слабые варианты антигенов), а также для типирования других антигенов эритроцитов. ID-карты ДиаМед можно использовать взамен или параллельно с изогемагглютинирующими сыворотками, реагентами анти-D, анти-DСЕ, цоликлонами анти-А, анти-В, анти-D и анти-D Супер.

• [показать] .

  Начальный этап выполняется по-разному, в зависимости от вида используемых ID-карт, содержащих поликлональные (см. ниже п.1а) или моноклональные (см. п. 16) антитела:

  1а) Приготовить взвесь исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения ICID-карты, содержащие поликлональные антитела) для чего:

  • выдержать Раствор для разведения 1 до достижения им комнатной температуры;
  • приготовить 5% суспензию исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения 1, поместив в пробирку 0,5 мл Раствора для разведения 1 и 50 мкл исследуемой цельной крови или 25 мкл эритроцитной массы;
  • аккуратно смешать и инкубировать 10 мин при комнатной температуре;
  • использовать не позднее 15 мин после инкубации.

  16) Приготовить взвесь исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения 2 (ID-карты, содержащие моноклинальные антитела) для чего:

  • выдержать Раствор для разведения 2 до достижения им комнатной температуры;
  • промаркировать чистые пробирки;
  • приготовить 5% суспензию исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения 2, поместив в пробирку 0,5 мл Раствора для разведения 1 и 50 мкл исследуемой цельной крови или 25 мкл эритроцитной массы.
• Дальнейшие действия [показать] .
  1. Промаркировать ID-карту (N исследуемого образца сыворотки или Ф.И.О. пациента).
  2. Снять защитную фольгу с пробирок ID-карты.
  3. В каждую пробирку ID-карты внести по 10 мкл исследуемых эритроцитов, приготовленных в соответствии с п.1а, или по 50 мкл исследуемых эритроцитов, приготовленных в соответствии с п.16.
  4. Установить ID-карты в ротор ID-центрифуги (с обязательным уравновешиванием другими ID-картами, возможно, неиспользованными).
  5. Центрифугировать ID-карты (время и скорость центрифугирования постоянны и заданы автоматически).
  6. Оценить результат исследования: Результат в контрольной микропробирке - "ctl" - должен быть всегда отрицательным. Положительная реакция в "контроле" может быть вызвана присутствием аутоантител и неспецифическими плазменными белками. Если "контроль" положителен - определение недостоверно, его необходимо повторить после однократного отмывания образца эритроцитов 0,9% раствором хлорида натрия или Раствором для разведения 2.
  7. Результаты определения каждого антигена внести в соответствующую графу ID-карты (на белом поле внизу под каждым антигеном).
  8. Идентифицировать результат по следующей схеме (табл. 18.7-18.9)

  Таблица 18.7. Результаты исследования антигенов группы крови АВО и резус-принадлежности в ID-карте АВО/Rh
  Выявляемые антигены					Заключение
  А	В	АВ	D	СDЕ
  +	+	+	+	+	АВ Rh+
  +	+	+	-	-	АВ Rh-
  +	-	+	+	+	А Rh+
  +	-	+	-	-	А Rh-
  -	+	+	+	+	В Rh+
  -	+	+	-	-	В Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Примечание: Специфичность исследования подтверждается по отрицательному результату в пробирке с контролем ID-карты.

  Таблица 18.8 Определение антигенов эритроцитов системы АВО
  Группа крови
  	анти-А	анти-В	анти-АВ
  0(1)	-	-	-
  А1(II)	++++	-	++++
  А2(II)	++++	-	++++
  А3(II)	++/+++	-	++/++++
  А x (II)*	-/++	-	+/++
  В(II)	-	++++	++++
  В3(III)	-	+/+++	+/+++
  В x (III)*	-	-/++	-/++
  А1В(IV)	++++	++++	++++
  А2В(IV)	+++/++++	++++	++++
  Примечание : * - определение очень слабых вариантов антигенов А и В требует дальнейших исследований.

  Таблица 18.9 Определение резус-принадлежности (D, СDЕ)
  Резус-принадлежность	Результаты исследования с сыворотками
  	Анти-D	Анти-СDЕ
  D-положительная	++++	++++
  D-отрицательная	-	-
  D-отрицательная, С	Е- положительная*	-
  Слабоположительная (D u)	от ± до +++	от +++ до ++++
  Примечание : * - Положительная реакция с сывороткой анти-СDЕ при отрицательной реакции с сывороткой анти-D свидетельствует о наличии антигенов С, Е и требует дальнейшего типирования с использованием ID-карт: С-с-Е-е-К-сtl или С-С w -с-Е-е-К

Используемые ID-карты

При определении групп крови и резус-принадлежности применяют поликлональные (табл. 18.10 [показать] ) и моноклональные (табл. 18.11 [показать] ) реагенты. Наиболее частое применение на практике вследствие экономической целесообразности находят моноклональные сыворотки.

По современной классификации лица с ослабленным вариантом антигена D, способные вырабатывать анти-D-антитела, подразделяются на семь категорий. Наибольшую частоту встречаемости и практическое значение имеет категория VI, эритроциты которой несут только эпитоп Z антигена D. Лица категории VI (резус-отрицательные реципиенты, но резус-положительные доноры!) могут вырабатывать антитела к неизмененному D и частичному D всех остальных категорий. Для подтверждения группы крови используют различные ID-карты: D(IV -) - для реципиентов, D(IV +) - для доноров.

Определение группы крови АВО и резус-принадлежности проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойная или перекрестная реакция) (табл. 18.12 [показать] ).

Для углубленного обследования используют другие карты (табл. 18.13-18.14 [показать] ).

Выявление антиэритроцитарных антител

Принцип метода

Исследуемые сыворотки и стандартные эритроциты для выявления антител добавляются в верхнюю часть микропробирок. После инкубации и центрифугирования агглютинированные эритроциты остаются в верхней части пробирки, так как не проходят через гель из-за большого размера агглютинатов (положительный результат). При отсутствии антител к антигенам тест-эритроцитов агглютинаты не образуются. Неагглютинированные эритроциты легко проходят через гель и оседают на дне пробирки (отрицательный результат). Характер агглютинации при выявлении антител к эритроцитам зависит от титра антител, их активность и оценивается от ++++ до +.

• Алгоритм проведения исследований [показать] .

  Типированные эритроциты перед исследованием необходимо предварительно дважды отмыть от консерванта 0,9% раствором хлорида натрия, а затем выполнить следующие действия:

  • выдержать Раствор для разведения 2 до достижения комнатной температуры;
  • промаркировать пробирки;
  • приготовить 0,8% взвесь типированных эритроцитов в Растворе для разведения 2, поместив в пробирку 1,0 мл Раствора для разведения 2 и 10 мкл крови;
  • снять защитную фольгу с ID-карты;
  • промаркировать ID-карту (номер исследуемого образца сыворотки или Ф.И.О. пациента);
  • добавить по 50 мкл стандартных эритроцитов в микропробирки;
  • добавить по 25 мкл сыворотки или плазмы исследуемого образца в каждую микропробирку;
  • инкубировать 15 мин при температуре +37"С;
  • центрифугировать ID-карты в ID-центрифуге (время и скорость центрифугирования постоянны и заданы автоматически).

  Примечание: стандартные эритроциты панели ID-DiaCell I-II-III и ID-DiaCell I-Ii-III P фирмы DiaMed готовы к применению без предварительного отмывания и обработки Раствором для разведения 2.

• Интерпретация результатов [показать] .

  Положительная реакция означает наличие в исследуемом образце иммунных антител.

  Если имеет место положительная реакция со всеми эритроцитами панели ID-DiaCell, рекомендуется выполнять аутоконтроль для исключения аутоантител в исследуемом образце.

  Если с одним или более видом эритроцитов панели ID-DiaCell реакция остается отрицательной, специфичность антител может быть установлена с помощью сопроводительного листа - таблицы антигенных профилей, прилагаемой ко всем упаковкам ID-DiaCell. При этом необходимо убедится в том, что номера панели ID-DiaCell1 и сопроводительного листа совпадают.

  Если данная панель не позволяет установить специфичность антител, рекомендуется продолжить идентификацию, используя расширенную панель эритроцитов ID-DiaРanel и/или ID-DiaРanel Р (в зависимости от первоначально использованной методики).

Скрининг и идентификация антител

Скрининг антител выполняется как в нейтральном геле, так и в геле, содержащем антиглобулиновый реагент (табл. 18.15-18.16 [показать] ). В первом случае для исследования используются обработанные ферментом эритроциты, во втором - суспензия эритроцитов в растворе низкой ионной силы. Скрининг и идентификация антител производятся с помощью стандартной панели эритроцитов. При оценке эффективности гелевого теста для скрининга и идентификации антител была установлена его более высокая чувствительность по сравнению с традиционными методиками.

Методы исследования антител к антигенам эритроцитов

• Антиглобулиновый тест (непрямая реакция Кумбса) [показать] .

  Непрямой антиглобулиновый тест (НАТ) используется для выявления антиэритроцитарных антител. Обычно НАТ выполняется в два этапа:

  1. инкубация эритроцитов и сыворотки (фиксация антител) с последующим отмыванием для удаления несвязавшихся глобулинов; постановка непрямого антиглобулинового теста в гелевом тесте не требует отмывания эритроцитов!
  2. инкубация отмытых эритроцитов с античеловеческим глобулином (АЧГ). Агглютинация свидетельствует о наличии в сыворотке антител, связавшихся с антигенами эритроцитов in vitro.

  НАТ используется для:

  1. определения в сыворотке реципиента антител к эритроцитам донора - при постановке пробы на совместимость;
  2. при скрининге "неожиданных" антиэритро-цитарных антител;
  3. при исследовании антиэритроцитарных антител у беременных;
  4. при исследовании антител в сыворотке больных аутоиммунной гемолитической анемией.

  Ход определения:

  • внести в три расположенные слева пробирки ID-карты по 50 мкл взвеси типированных эритроцитов;
  • добавить в пробирки по 25 мкл исследуемой сыворотки;
  • центрифугировать ID-карты в течение 10 мин;
  • оценить результат исследования. Вписать полученный результат в ID-карту.

  Результаты определения:

  • положительный результат свидетельствует о наличии иммунных (алло) антител в исследуемой сыворотке или плазме (для выяснения специфичности антител используется таблица, прилагаемая к стандартным эритроцитам);
  • отрицательный результат свидетельствует об отсутствии иммунных антител в исследуемой сыворотке или плазме.
• Ферментный метод [показать] .

  Обработка протеолитическими ферментами повышает агглютинабельность эритроцитов.

  Ход определения:

  • внести в расположенные справа три пробирки ID-карты по 50 мкл взвеси стандартных типированных эритроцитов;
  • добавить в пробирки по 25 мкл Раствора для разведения 1;
  • добавить в пробирки по 25 мкл исследуемой сыворотки.

  Примечание: Раствор для разведения 1 не добавляется, если для исследования используются стандартные типированные эритроциты, предварительно обработанные протеолитическим ферментом (например, ID-DiaCell I-II-III P фирмы DiaMed).

  • инкубировать в течение 15 мин при температуре +37°С;
  • центрифугировать ID-карты в Ш-цент-рифуге в течение 10 мин (параметры установлены автоматически);
  • вписать полученный результат в ID-карту.

  Результаты исследования:

  • положительный результат свидетельствует о наличии аллоантител в исследуемой сыворотке или плазме (для выяснения специфичности антител используется таблица, прилагаемая к стандартным эритроцитам);
  • отрицательный результат свидетельствует об отсутствии аллоантител в исследуемой сыворотке или плазме.
• Метод холодовой агглютинации [показать] .

  Ход определения:

  • выдержать Раствор для разведения 2, типированные эритроциты и ID-карты в течение 30 мин при температуре 2-8°С;
  • обработать типированные эритроциты Раствором для разведения 2, для чего:
    • промаркировать пробирку;
    • приготовить 0,8% взвесь типированных эритроцитов в Растворе для разведения 2, поместив в пробирку 1,0 мл Раствора для разведения 2 и 10 мкл крови.

  Примечание: стандартные эритроциты ID-DiaCell (фирмы DiaMed) готовы к использованию и не требуют разведения;

  • внести в три расположенные справа пробирки ID-карты по 50 мкл взвеси типированных эритроцитов, обработанных Раствором для разведения 2;
  • добавить в эти пробирки по 25 мкл исследуемой сыворотки;
  • инкубировать в течение 30 мин при температуре 2-8 С;
  • центрифугировать ID-карты в ID-центрифуге в течение 10 мин (параметры установлены автоматически);
  • оценить результат исследования;
  • вписать полученный результат в ID-карту. Результаты исследования:
  • положительный результат свидетельствует о наличии холодовых антител в исследуемой сыворотке или плазме (для выяснения специфичности антител используется таблица, прилагаемая к стандартным эритроцитам);
  • отрицательный результат свидетельствует об отсутствии холодовых антител в исследуемой сыворотке или плазме.

  При наличии в исследуемой сыворотке холодовых или тепловых аутоантител могут наблюдаться ложноположительные результаты. Для исключения их необходимо поставить аутоконтроль:

  • приготовить 0,8% взвесь эритроцитов исследуемой крови в Растворе для разведения 2, добавив к 1,0 мл Раствора для разведения 2 10 мкл цельной крови;
  • внести по 50 мкл приготовленной взвеси эритроцитов в пробирку ID-карты, расположенную слева (для реакции Кумбса), или в пробирку ID-карты, расположенную справа (для ферментного метода и холодовой агглютинации);
  • в пробирки ID-карты внести по 25 мкл исследуемой сыворотки (для ферментного метода необходимо внести в пробирки еще по 25 мкл Раствора для разведения 1);
  • карты инкубировать 15 мин при температуре +37°С (для реакции Кумбса и ферментного метода) или при температуре 2-8°С (для постановки аутоконтроля холодовой агглютинации).

  Положительный результат в аутоконтроле свидетельствует о присутствии в исследуемой сыворотке аутоантител.

Определение совместимости крови донора и реципиента

Целью пробы на индивидуальную совместимость является предотвращение трансфузий гемокомпонентов, несовместимых по антигенам эритроцитов. Тестирование сыворотки реципиента с эритроцитами предполагаемого донора - наиболее надежный способ выявления антител, способных вызвать повреждение перелитых эритроцитов, посттрансфузионные реакции и осложнения гемолитического типа. Проведение такой пробы позволяет:

1. подтвердить АВО-совместимость донора и реципиента;
2. выявить антитела в сыворотке реципиента, направленные против антигенов эритроцитов донора.

Тестирование на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента по антигенам эритроцитов(табл.18.17 [показать] ) не заменяет обязательное имуногематологическое исследование (типирование антигенов эритроцитов систем АВО, Резус, Келл, выявление антиэритроцитарных антител, поиск и идентификацию аллоантиэритроцитарных антител), а лишь дополняет его.

Ввиду того, что сенсибилизация может появиться даже после трансфузий индивидуально подобранных гемокомпонентов, для проведения проб на совместимость необходимо использовать каждый раз свежую сыворотку пациента, полученную после последней трансфузии гемокомпонентов.

Проба на совместимость должна быть проведена для каждого образца крови донора!

• Ход определения [показать]
  • выдержать Раствор для разведения 2 до достижения комнатной температуры (20-24°С);
  • промаркировать ID-карты и пробирки (Ф.И.О. донора и реципиента);
  • приготовить 0,8% суспензию эритроцитов донора и реципиента в Растворе для разведения 2 для чего в две маркированные пробирки внести по 1 мл Раствора для разведения 2, добавить по 10 мкл крови донора и реципиента, соответственно;
  • смешать;
  • снять защитную фольгу с соответствующей ID-карты;
  • добавить по 50 мкл приготовленной суспензии эритроцитов донора в микропробирки ID-карты 1, 2, 3, 4, 5;
  • добавить по 50 мкл приготовленной суспензии эритроцитов реципиента в микропробирки ID-карты 4, 5, 6;
  • добавить по 25 мкл сыворотки или плазмы реципиента в микропробирки ID-карты 1, 2, 3, 6;
  • добавить 25 мкл Раствора для разведения 1 в микропробирку ID-карты 4 (ферментный тест);
  • инкубировать 15 мин при температуре +37°С;
  • центрифугировать (время и скорость центрифугирования постоянны и заданы автоматически);
  • оценить результат исследования. Совместимость по антигенам А, В, D (1, 2, 3 микропробирки):
  • четкий положительный или отрицательный результат указывает на соответствие антигенов А, В, О эритроцитов крови донора и реципиента;
  • если наблюдается двойная популяция эритроцитов (в одной микропробирке положительный и отрицательный результат) антигены А, В, D донора и реципиента не идентичны!
  • определение совместимости по антигенам А, В, D действительно только при отрицательной реакции в 6-ой микропробирке (аутоконтроль).
• Результаты пробы на совместимость (4, 5 микропробирки) [показать]
  • положительный результат в микропробирках ID-карт 4, 5 при отрицательном контроле (микропробирка 6) свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента по антигенам эритроцитов;
  • отрицательный результат в микропробирках ID-карт 4, 5, 6 свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по антигенам эритроцитов;
  • положительная реакция в микропробирке ID-карты 6 (аутоконтроль) требует дальнейшего определения ауто- и аллоантител в сыворотке (плазме) реципиента.
• Ограничения [показать]
  • определенные лекарственные средства могут вызывать ложноположительную реакцию Кумбса;
  • при некоторых патологических состояниях у больных может наблюдаться положительная реакция Кумбса;
  • бактериальное или другое загрязнение используемого материала может вызывать ложноположительный или ложноотрицательный результат;
  • остатки фибрина в исследуемых образцах могут связывать неагглютинированные клетки и после центрифугирования образовывать тонкую розовую линию на поверхности геля, тогда как большинство клеток будет локализовано на дне микропробирки;
  • суспензии эритроцитов, имеющие чрезмерную концентрацию, могут вызывать ложноположительные реакции.
• Условия хранения и эксплуатации [показать]

  ID-карты ДиаМед должны храниться при комнатной температуре (+18-25°С) в сухом помещении в течение всего срока годности.

  Срок годности карт - 18 месяцев. Срок годности реагентов - 2 года.

  Результаты исследования на карте сохраняются в неизменном виде:

  • 48 ч при комнатной температуре;
  • три недели в холодильнике (при +2-8°С) при заклеенной липкой лентой верхней части ID-карты.

  Нижнее поле ID-карты можно отклеить или отрезать и использовать как документ в истории болезни или в картотеке.

  Не допускается использование ID-карт с признаками высыхания геля, пузырьками в его толще или повреждением защитной фольги.

  Перед использованием образцы и реагенты должны быть выдержаны до комнатной температуры.

Заключение

Гелевый тест является простым, воспроизводимым, быстрым и очень чувствительным методом, позволяющим сразу выявлять слабые варианты антигенов эритроцитов. Тест оценивается только макроскопически. После короткого обучения персонала, необходимого для правильного выполнения теста, сводятся к минимуму затраты рабочего времени и ошибки, встречающиеся при использовании традиционных методик.

Гелевый тест позволяет стандартизировать лабораторные методики, дать объективную оценку результатов реакции гемагглютинации. Стабильность результатов теста позволяет перепроверять полученные данные, что необходимо для контроля. Результаты теста могут быть фотокопированы для сохранения их в архиве или для учебных целей в сложнодиагностируемых случаях. Для теста используется небольшое количество сыворотки или эритроцитов, что чрезвычайно важно для педиатрических клиник.

Использование гелевой системы позволяет снизить риск заражения персонала даже при работе с потенциально инфицированными образцами. Гелевый тест может быть использован для проведения проб на совместимость по антигенам эритроцитов перед переливанием крови. Для этого используются непрямой антиглобулиновый тест и одностадийный ферментный метод.

Гелевый тест выполняется и оценивается по выше приведенным правилам. Отсутствие этапов отмывания эритроцитов при выполнении непрямого атиглобулинового теста позволяет более эффективно использовать рабочее время, а также благодаря стабильности результатов теста контролировать все полученные результаты.

Источник : Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001

Подбор доноров проводят по единым медицинским критериям, что обеспечивает безвредность, высокую активность и эффективность крови и её компонентов.

Каждый донор перед сдачей крови проходит обследование: у него собирают анамнез, проводят тщательный медицинский осмотр и специальное обследование для выявления противопоказаний к сдаче крови и исключения возможности передачи с кровью возбудителей инфекционных заболеваний. Проводят серологическое, вирусологическое и бактериологическое обследования донорской крови.

Успехи клинической трансфузиологии снижают опасность передачи с кровью и её компонентами возбудителей инфекционных заболеваний (ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С, сифилиса, цитомегаловирусной инфекции и др.).

Основные антигенные системы крови

Установлено, что антигенная структура крови человека сложна, все форменные элементы крови и белки плазмы разных людей отличаются по антигенам. Уже известно около 500 антигенов крови, образующих более 40 различных антигенных систем.

Под антигенной системой понимают совокупность антигенов крови, наследуемых (контролируемых) аллельными генами.

Все антигены крови делят на клеточные и плазменные. Основное значение в трансфузиологии имеют клеточные антигены.

Клеточные антигены

Клеточные антигены - сложные углеводно-белковые комплексы (гликопептиды), структурные компоненты мембраны клеток крови. От других компонентов клеточной мембраны они отличаются иммуногенностью и серологической активностью.

Иммуногенность - способность антигенов индуцировать синтез антител, если они попадают в организм, у которого эти антигены отсутствуют.

Серологическая активность - способность антигенов соединяться с одноимёнными антителами.

Молекула клеточных антигенов состоит из двух компонентов:

Шлеппер (белковая часть антигена, расположенная во внутренних слоях мембраны), определяющий иммуногенность;

Гаптен (полисахаридная часть антигена, расположенная в поверхностных слоях клеточной мембраны), определяющий серологическую активность.

На поверхности гаптена расположены антигенные детерминанты (эпитопы) - молекулы углеводов, к которым присоединяются антитела. Известные антигены крови отличаются друг от друга эпитопами.

Например, гаптены антигенов системы АВ0 имеют следующий набор углеводов: эпитоп антигена 0 - фукоза, антигена А - N-ацетилгалактозамин, антигена В - галактоза. С ними и соединяются групповые антитела.

Различают три вида клеточных антигенов:

Эритроцитарные;

Лейкоцитарные;

Тромбоцитарные.

Эритроцитарные антигены

Известно более 250 антигенов эритроцитов, образующих свыше 20 антигенных систем. Клиническое значение имеет 11 систем: АВ0, Резус (Rh-Hr), MNSs, Келл (Kell), Лютеран (Lutheran), Кидд (Kidd), Диего (Diego), Даффи (Duffy), Домброк (Dombrock), ферментные группы эритроцитов.

У человека в эритроцитах присутствуют одновременно антигены нескольких антигенных систем.

Основными в трансфузиологии признаны антигенные системы АВ0 и Резус. Другие антигенные системы эритроцитов в настоящее время существенного значения в клинической трансфузиологии не имеют.

Антигенная система АВ0

Система АВ0 - основная серологическая система, определяющая совместимость или несовместимость переливаемой крови. Её составляют два генетически детерминированных агглютиногена (антигены А и В) и два агглютинина (антитела α и β).

Агглютиногены А и В содержатся в строме эритроцитов, а агглютинины α и β - в сыворотке крови. Агглютинин α - антитело по отношению к агглютиногену А, а агглютинин β - по отношению к агглютиногену В. В эритроцитах и сыворотке крови одного человека не может быть одноимённых агглютиногенов и агглютининов. При встрече одноимённых антигенов и антител возникает реакция изогемагглютинации. Именно эта реакция - причина несовместимости крови при гемотрансфузии.

В зависимости от сочетания в эритроцитах антигенов А и В (и соответственно в сыворотке антител α и β) всех людей разделяют на четыре группы.

Антигенная система Резус

Резус-фактор (Rh-фактор), названный так вследствие того, что впервые был обнаружен у макак резус, присутствует у 85% людей, а у 15% отсутствует.

В настоящее время известно, что система Резус достаточна сложна и представлена пятью антигенами. Роль резус-фактора при гемотрансфузии, а также при беременности крайне велика. Ошибки, приводящие к развитию резус-конфликта, вызывают тяжёлые осложнения, а иногда и смерть больного.

Второстепенные антигенные системы

Второстепенные эритроцитарные групповые системы представлены большим количеством антигенов. Знание этого множества систем имеет значение для решения некоторых вопросов в антропологии, судебно-медицинских исследований, а также для предотвращения развития посттрансфузионных осложнений и некоторых заболеваний у новорождённых.

Система MNSs включает факторы М, N, S, s. Доказано наличие двух тесно сцепленных между собой генных локусов MN и Ss. В дальнейшем были выявлены другие многообразные варианты антигенов системы MNSs. По химической структуре MNSs - гликопротеиды.

Система Р. Система антигена Р имеет определённое клиническое значение. Отмечены случаи ранних и поздних выкидышей, причиной которых стали изоантителаанти-Р. Описано несколько случаев посттрансфузионных осложнений, связанных с несовместимостью донора и реципиента по системе антигенов Р.

Система Келл представлена тремя парами антигенов. Наибольшей иммуногенной активностью обладают антигены Келл (К) и Челлано (к). Антигены системы Келл могут вызывать сенсибилизацию организма во время беременности и при переливании крови, становиться причиной гемотрансфузионных осложнений и развития гемолитической болезни новорождённых.

Система Лютеран. Один из доноров по фамилии Лютеран имел в эритроцитах крови какой-то ранее неизвестный антиген, приведший к иммунизации реципиента. Антиген был обозначен буквами Lu а. Через несколько лет был открыт второй антиген этой системы Lu b. Их частота: Lu а - 0,1%, Lu b - 99,9%. Антитела анти-Lu b изоиммунные, что подтверждено и сообщениями о значении этих антител в происхождении гемолитической болезни новорождённых. Клиническое значение антигенов системы Лютеран невелико.

Система Кидд. Антигены и антитела системы Кидд имеют определённое практическое значение. Они могут быть причиной развития гемолитической болезни новорождённых и посттрансфузионных осложнений при многократном переливании крови, не совместимой по антигенам этой системы. Частота антигенов составляет около 75%.

Система Диего. В 1953 г. в Венесуэле в семье Диего родился ребёнок с признаками гемолитической болезни. При выяснении причины этого заболевания у ребёнка был обнаружен ранее неизвестный антиген, обозначенный фактором Диего (Di). В 1955 г. проведённые исследования выявили, что антиген Диего - расовый признак, характерный для народов монголоидной расы.

Система Даффи состоит из двух основных антигенов - Fy а и Fy b. Антитела анти-Fy а - неполные антитела, они проявляют своё действие только в непрямом антиглобулиновом тесте Кумбса. Позднее были обнаружены антигены Fy x, Fy 3 , Fy 4 , Fy 5 . Частота зависит от расовой принадлежности человека, что имеет большое значение для антропологов. В негроидных популяциях частота фактора Fy a - 25%, среди китайского населения, эскимосов и аборигенов Австралии - почти 100%, у людей европеоидной расы - 60-82%.

Система Домброк. В 1973 г. были выявлены антигены Do а и Do b. Фактор Do а встречают в 55-60% случаев, а фактор Do b - в 85-90%. Такая частота выдвигает эту серологическую систему крови на пятое место по информативности в аспекте судебно-медицинского определения отцовства (система Резус, MNSs, AB0 и Даффи).

Ферментные группы эритроцитов. Начиная с 1963 г. стало известно значительное количество генетически полиморфных ферментных систем эритроцитов крови человека. Эти открытия сыграли значительную роль в развитии общей серологии групп крови человека, а также в аспекте судебно-медицинской экспертизы спорного отцовства. К ферментным системам эритроцитов относят фосфатглюкомутазу, аденозиндезаминазу, глутамат-пируват-трансаминазу, эстеразу-Д и др.

Основные положения. Клетки крови и плазма содержат огромное количество антигенов. Так, эритроциты несут около 400 антигенов, лейкоциты и тромбоциты в дополнение к специфическим для них антигенам — антигены HLA . Белки плазмы также характеризуются большим антигенным разнообразием. Патологический иммунный ответ на эти антигены лежит в основе патогенеза целого ряда заболеваний.

1. Реакция гемагглютинации — один из основных методов, с помощью которого определяют эритроцитарные антигены. Агглютинация эритроцитов опосредована антителами. Скорость и выраженность этого процесса зависят от числа эритроцитов, концентрации антител, pH , температуры и ионной силы раствора. Агглютинация происходит, когда силы связывания превышают силы отталкивания, обусловленные отрицательным зарядом клеточной поверхности эритроцитов. IgM , несущие 10 участков связывания, вызывают агглютинацию эритроцитов даже в физиологическом растворе. IgG не могут вызвать агглютинацию, пока отрицательный заряд эритроцитов не будет снижен с помощью какого-либо высокомолекулярного вещества (например, бычьего альбумина) или удаления сиаловых кислот (для этого эритроциты обрабатывают протеазами: фицином, папаином, бромелином или трипсином). Агглютинация также зависит от доступности, т. е. количества и локализации молекул антигена на поверхности эритроцита. Антигены системы AB0 (эритроцитарные антигены A и B) находятся на внешней поверхности клеточной мембраны и поэтому легко связываются с антителами, а антигены системы Rh — в ее толще. Доступность таких антигенов повышается при обработке эритроцитов ферментами.

2. Проба Кумбса — метод лабораторной диагностики, основанный на реакции гемагглютинации.

а. Прямая проба Кумбса применяется для выявления антител или компонентов комплемента, фиксированных на поверхности эритроцитов. Она проводится следующим образом.

1) Для получения антител к человеческим иммуноглобулинам (антиглобулиновой сыворотки) или комплементу (антикомплементарной сыворотки) животное иммунизируют человеческой сывороткой, иммуноглобулинами или комплементом человека. Полученную от животного сыворотку очищают от антител к другим белкам.

2) Эритроциты больного отмывают физиологическим раствором для полного удаления сыворотки, которая нейтрализует антитела к иммуноглобулинам и комплементу и может стать причиной ложноотрицательного результата.

3) Если на поверхности эритроцитов фиксированы антитела или компоненты комплемента, добавление антиглобулиновой или антикомплементарной сыворотки вызывает агглютинацию эритроцитов.

б. Непрямая проба Кумбса позволяет обнаружить антитела к эритроцитам в сыворотке. Для этого сыворотку больного инкубируют с донорскими эритроцитами группы 0, а затем проводят прямую пробу Кумбса, как описано выше.

в. Прямую пробу Кумбса

1) Аутоиммунный гемолиз.

2) Гемолитическая болезнь новорожденных.

3) Лекарственная иммунная гемолитическая анемия.

4) Гемолитические трансфузионные реакции.

г. Непрямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях.

1) Определение индивидуальной совместимости крови донора и реципиента.

2) Выявление аллоантител, включая антитела, вызывающие гемолитические трансфузионные реакции.

3) Определение поверхностных эритроцитарных антигенов в медицинской генетике и судебной медицине.

4) Подтверждение однояйцовости близнецов при трансплантации костного мозга.

Б. Поверхностные антигены эритроцитов делятся на полисахаридные и белковые. К полисахаридным относятся антигены систем AB0, MNSs, Ii и P, к белковым — антигены систем Rh , Келл, Кидд и Даффи.

1. Полисахаридные антигены обладают следующими свойствами.

а. Стимулируют преимущественно выработку IgM .

б. Стимулируют выработку как тепловых (реагирующих с антигеном при 37°C), так и холодовых (реагирующих с антигеном при 4°C) антител.

в. Изогемагглютинины направлены против полисахаридных антигенов системы AB0: кровь группы A содержит антитела к антигену B, кровь группы B — антитела к антигену A, кровь группы 0 — антитела к антигенам A и B, кровь группы AB не содержит изогемагглютининов.

г. Связывание полисахаридных антигенов эритроцитов с антителами вызывает острые гемолитические трансфузионные реакции.

2. Белковые антигены стимулируют преимущественно выработку тепловых антител — IgG , которые вызывают отсроченные гемолитические трансфузионные реакции.

1. Функции антигенов эритроцитов

антиген кровь эритроцит резус

Антигены эритроцитов человека являются структурными образованиями, расположенными на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающими способностью взаимодействовать с соответствующими антителами и образовывать комплекс антиген-антитело. Антигены эритроцитов наследуются от родителей.

Часть антигена, непосредственно взаимодействующая с антителом, называется антигенной детерминантой. Одна молекула антигена может содержать одну или несколько антигенных детерминант.

Свойство антигенов взаимодействовать со специфическими антителами используется для диагностики антигенов in vitro. При этом их взаимодействие проявляется в виде реакции агглютинации эритроцитов антителами и появление агрегатов эритроцитов. Первостепенное клиническое значение имеют антигены системы АВ0 и Резус. Меньшее клиническое значение других антигенов эритроцитов объясняется низкой иммуногенностью антигенов, и соответственно, редкой выработкой антител.

В настоящее время известно около 236 антигенов эритроцитов, которые распределяются в 29 генетически независимых системах (рис. 1.). Каждая система антигенов эритроцитов кодируется одним геном (система Н) или несколькими гомологичными генами (Резус, MNS).

Рис. 1. Перечень некоторых систем антигенов эритроцитов

Антигены эритроцитов:

структурные компоненты мембраны эритроцитов;

передаются по наследству;

обладают иммуногенностью (вызывают выработку антител);

взаимодействуют с антителами, образуя комплекс антиген-антитело.

2. Химическая природа антигенов эритроцитов

Антигены эритроцитов являются:

) протеинами (антигены эритроцитов системы Резус, Кидд, Диего, Колтон);

2) гликопротеинами (антигены эритроцитов систем MNS, Гебрих, Лютеран);

3) гликолипидами (антигены эритроцитов систем AB0, Н, Le, I).

Гены полисахаридных антигенов (AB0, Н, Р, Левис, I) кодируют специфические гликозилтрансферазы - ферменты, присоединяющие различные сахара к полисахаридным цепям-предшественниками формирующие таким образом антигенную структуру антигенов.

Гены белковых антигенов эритроцитов кодируют полипептиды, которые сами встраиваются в мембрану эритроцита и формируют антигенные детерминанты. Ряд антигенов представлен только на эритроцитах (Резус, Келл), другие же экспрессируются и в некроветворных тканях (AB0, Левис, Индиан).

Большинство антигенов эритроцитов крови человека было открыто при изучении причин посттрансфузионных осложнений гемолитического типа или гемолитической болезни новорожденных и получило название по имени лиц, у которых обнаружена данная патология. Так, например, система антигенов эритроцитов Лютеран, была названа по фамилии донора, у которого впервые были выявлены антитела, названные затем анти-Lu2. Система антигенов Келл была названа по первым буквам фамилии лица, выработавшего антитела (Kelleher).

Схематическое строение антигенов эритроцитов и расположение их на мембране эритроцитов представлено на рис. 2.

3. Современная классификация антигенов

Все антигены эритроцитов принадлежат к одной из трех категорий:

1) системе антигенов эритроцитов (основной признак, объединяющий антигены эритроцитов в систему, является общность контролируемых их генов);

) коллекции антигенов эритроцитов (антигены эритроцитов связаны биохимически и серологически на уровне фенотипа);

) серии антигенов эритроцитов (включают антигены эритроцитов, для которых не изучены гены, кодирующие их).

4. Антигены эритроцитов системы АВ0

Одной из основных систем антигенов является система антигенов АВ0, которая включает 4 антигена: А, В, АВ, А1. Характерной особенностью, отличающей систему антигенов эритроцитов АВ0 от других систем антигенов, является постоянное присутствие в сыворотках людей (кроме лиц с группой крови АВ) антител, направленных к антигенам А или В. Антитела к антигенам эритроцитов других систем не являются врожденными и вырабатываются в следствие антигенной стимуляции.

Характеристика антигенов А и В. Антигены системы АВ0 развиваются на эритроцитах еще до рождения ребенка. Обнаружено присутствие А антигена на эритроцитах 37-дневного плода. Однако полное созревание антигенов данной системы, со всеми им присущими серологическими свойствами, происходит только через несколько месяцев после рождения.

У взрослых людей на эритроцитах могут присутствовать следующие антигены системы АВ0: А, В. Кроме того, на эритроцитах присутствует антиген Н1. Последний является предшественником антигенов А и В, а также обнаруживается в большом количестве на поверхности эритроцитов, принадлежащих к группе крови 0.

А, В и Н антигены присутствуют не только на эритроцитах, но в различных концентрациях и в клетках большинства тканей организма. Эти антигены являются частью мембран клеток. Кроме существования водонерастворимого материала на поверхности клеток у 78% лиц имеются АВН антигены в растворенном виде в различных секреторных жидкостях организма.

Антиген Н не входит в систему антигенов эритроцитов АВ0, а принадлежит к системе антигенов Н.

Биохимическая природа антигенов А, В, Н. Антигены А, В и Н по химической природе являются гликолипидами и гликопротеинами. Три детерминанты (А, В и Н), в основном, имеют один и тот же химический состав. Отличия в серологической специфичности определяются терминальными сахарами, прикрепленными к основной цепи. Они различны у трех антигенов:

·L-фукоза - для антигена Н;

·б-N-ацетилгалактозамин для антигена А;

·D-галактоза - для антигена В (рис. 3.)

5. Система антигенов эритроцитов Резус

Резус обнаружен в 1919 г. в крови обезьян, у человека была открыта в 1940 году Ландшейнером и Винером и насчитывает в настоящее время 48 антигенов.

Антигены системы Резус имеют белковую природу. Чаще всего встречаются резус-антигены типа D (85%), С (70%), Е (30%), е (80%) - они же и обладают наиболее выраженной антигенностью. Среди антигенов системы Резус наибольшее клиническое значение имеет антиген D. Обладая выраженными иммуногенными свойствами, антиген D в 95% случаев является причиной гемолитической болезни новорожденных при несовместимости матери и плода, а также частой причиной тяжелых посттрансфузионных осложнений. Лиц, имеющих антиген D, относят к резус-положительным, а не имеющих антиген D - к резус-отрицательным.

Разновидности антигена D. Характерной чертой антигенов системы Резус является полиморфизм, что обусловливает наличие большого количества разновидностей антигенов.

Согласно современному представлению о строении антигена D известно, что антиген состоит из структурных единиц - эпитопов. В последние годы описано более 36 эпитопов. На эритроцитах различных индивидов с резус-положительной принадлежностью могут присутствовать все эпитопы или отсутствовать некоторые из них. Чаще всего эритроциты здоровых лиц экспрессируют все эпитопы антигена D (нормально выраженный D антиген). Образцы эритроцитов, экспрессирующие не все эпитопы антигена D, обозначают термином D вариантный (D partial - частичный). В то время, как образцы эритроцитов, имеющие сниженную экспрессию антигена D, называют D слабый (D weak) (рис. 5).

Рис. 5. Разновидность антигена D

Ранее не существовало возможности дифференцировать D слабый и D вариантные антигены друг от друга, поэтому они обозначались общим термином Du. Но в настоящее время, благодаря использованию моноклинальных антител, это стало возможно. Поэтому за рубежом термин Du больше не используется.

6. Второстепенные антигенные системы крови

Второстепенные эритроцитарные групповые системы также представлены большим количеством антигенов. Знание этого множества систем имеет значение для решения некоторых вопросов в антропологии, для судебно-медицинских исследований, а также для предотвращения развития посттрансфузионных осложнений и предотвращения развития некоторых заболеваний у новорожденных.

Наиболее изученные антигенные системы эритроцитов:

а) групповая система Келл (Kell) состоит из 2 антигенов, образующих 3 группы крови (К-К, К-k, k-k). Антигены системы Келл по активности стоят на втором месте после системы резус. Они могут вызвать сенсибилизацию при беременности, переливании крови; служат причиной гемолитической болезни новорожденных и гемотрансфузионных осложнений.

б)групповая система Кидд (Kidd) включает 2 антигена, образующих 3 группы крови: lk (a+b-), lk (A+b+) и lk (a-b+). Антигены системы Кидд также изоиммунными свойствами и могут привести к гемолитической болезни новорожденных и гемотрансфузионным осложнениям.

в) групповая система Даффи (Duffy) включает 2 антигена, образующих 3 группы крови Fy (a+b-), Fy (a+b+) и Fy (a-b+). Антигены системы Даффи в редких случаях могут вызвать сенсибилизацию и гемотрансфузионные осложнения.

г) групповая система MNSs является сложной системой; она состоит из 9 групп крови. Антигены этой системы активны, могут вызвать образование изоиммунных антител, то есть привести к несовместимости при переливании крови; известны случаи гемолитической болезни новорожденных, вызванные антителами, образованными к антигенам этой системы.

Репетиторство

Нужна помощь по изучению какой-либы темы?

Наши специалисты проконсультируют или окажут репетиторские услуги по интересующей вас тематике.
Отправь заявку с указанием темы прямо сейчас, чтобы узнать о возможности получения консультации.