Ротавирусная инфекция телят. Виды инфекций у телят и крс Протокол вскрытия теленка при ротавирусной инфекции

Ротавирусная диарея (Diarrhea rotaviralis vitulorum, Rotavirosis ingectiosa bovuim) - остропротекающая болезнь телят, характери­зующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, диареей и дегидратацией.

Основные данные по изучению рота- и коронавирусов крупно­го рогатого скота получены за последние 20 лет. С. Mebus с сотр. (США) в 1969 г. выделил из фекалий больных новорожденных те­лят вирусный агент и воспроизвел диарею у телят-гнотобиотов, не получавших молозива. Впоследствии ротавирусы были обнаруже­ны у поросят, ягнят и других животных. О. В. Богатыренко и др. в 1976 г. обнаружили в фекалиях телят, больных диареей, рота- и коронавирусные агенты. В настоящее время ротавирусная диарея описана в 20 странах мира и является актуальной проблемой.

Возбудитель. Болезнь вызывает вирус рода Rotavirus семейства Reoviridae. В последний входят ротавирусы человека, коров (BRV007, BRV014, HN-7, Небраски), овец, коз, свиней, обезьян, лошадей (вирус НО-5, штамм 123), оленей, кроликов, уток. Уста­новлена общность группоспецифических и типоспецифических антигенов ротавирусов телят и человека, а также групповых анти­генов вируса телят, мышей и человека. Ротавирусы крупного рога­того скота, свиней, лошадей и кроликов родственны. При поста­новке реакции нейтрализации с гомологичными штаммами рота-вируса и гипериммунными сыворотками от морских свинок, бе­лых крыс и телят титры антител были одинаковыми.

Известны три серотипа возбудителя.

Для культивирования ротавируса используют первично трип-синизированные клетки почки эмбриона коровы, почки обезья­ны, однодневных поросят и др. Опыты по адаптации штаммов к клеткам показали, что цитопатогенное действие вируса появля­лось через различное количество пассажей, а у некоторых штам­мов лишь с 9-го пассажа. При повышении числа пассажей сокра­щалось время проявления цитопатогенного действия.

Ротавирусы крупного рогатого скота устойчивы к воздействию физических и химических (хлороформу, эфиру, фреону) факто­ров. Вирус устойчив к колебаниям рН от 3 до 5, действию концен­трированных солей, жирорастворителей, ферментов желудка и сычуга (трипсину, химотрипсину). Сохраняется в фекалиях до 9 мес, при температуре минус 60 °С - в течение нескольких меся­цев, при 4 °С - не менее 1 мес. Инактивация ротавирусов при 50 °С происходит в течение 1 ч.

Инактивирующе на возбудителя действуют хлор, двуоксид хло­ра, монохлорамин, а также 10%-ный формалин, 5%-ный раствор лизола, которые инактивируют ротавирус за 2 ч.

Эпизоотологические данные. К ротавирусной диарее восприим­чивы животные разных видов, а также люди. Чаще болеют телята в зимне-осенний и весенний периоды в 2-3-дневном возрасте. За­болеваемость достигает 100 %, летальность - 50 %. Отмечена пря­мая связь между заболеванием новорожденных телят диареей и обнаружением ротавируса в их фекалиях, который выделяется у телят до 12-дневного возраста (19,1-45,2 %).

Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с каловыми массами. Важный ас­пект при распространении ротавирусных энтеритов - возмож­ность скрытого течения болезни. С. F. Grouch и S. D. Acres мето­дом ELISA обнаружили ротавирус в фекалиях 44 % здоровых жи­вотных одного стада, в пяти стадах 70 % проб фекалий содержали свободные и ассоциированные коронавирусы, а 42 % проб - од­новременно ротавирус и коронавирус. В распространении болез­ни немаловажную роль играют собаки, кошки и дикие животные. Сохранению вируса в стаде способствует повторное инфицирова­ние взрослых животных от молодняка.

Заражение телят происходит алиментарно после рождения. Имеются сообщения, что ротавирусы могут проходить через пла­центу и инфицировать плод.

Биологическая особенность возбудителя - поражение гетеро-логичных хозяев. Ротавирусы телят вызывают диарею у поросят; ротавирусы жеребят и ягнят также репродуцируются у свиней, ко­торые, в свою очередь, могут заражать телят; ротавирусы крыс - у людей; ротавирусы человека поражают телят, поросят, щенков. Антитела к ротавирусу телят обнаружены в сыворотке крови со­бак, лошадей и кошек.

Установлено близкое родство ротавирусов крыс и людей к штамму бычьего и свиного ротавирусов группы В.

Патогенез. Ротавирус репродуцируется и поражает эпители­альные клетки апикальной части ворсинок тонкого кишечника и мезентериальные лимфоузлы, вызывая вакуолизацию и преждев­ременное ел ушивание, что приводит к укорачиванию ворсинок кишечника и покрытию их незрелым кубическим эпителием. Всасывающая функция ворсинок частично или полностью пре­кращается.

Пораженные вирусом эпителиальные клетки выделяются с фе­калиями в первые 4-5 ч после начала диарейного синдрома, а сам вирус выделяется в течение 23 дней, а по другим данным - до 58 дней после инфицирования. Антитела, продуцируемые слизистой кишечника, появляются между 3 и 12 днями, а в фекалиях - между 4 и 18 днями после заражения телят. Поэтому реинфекция их через 5-70 дней после первичной болезни вызывает вторич­ный иммунный ответ.

Незрелые клетки эпителия ослабляют глюкозосвязанный транспорт натрия, что способствует развитию острой диареи и ча­сто приводит к летальному исходу.

Клинические признаки. На степень тяжести болезни могут вли­ять многочисленные различные факторы: штамм, вирулентность и доза вируса, возраст телят, иммунный статус молодняка, сопут­ствующие инфекции (эшерихиоз, протейная инфекция и др.).

Инкубационный период длится 16-24 ч. Течение острое. Симптомы болезни проявляются выделением водянистых фека­лий желтоватого цвета и кисловатого запаха. Температура тела, как правило, нормальная, иногда поднимается до 41 °С, аппетит несколько снижен. Телята угнетены, отказываются от воды, у них отмечают атаксию, депрессию.

При развитии болезни фекалии становятся грязно-желтого цвета, а в дальнейшем - с примесью крови. Отмечают западание глаз, дегидратацию и фибрилляцию мышц конечностей, истече­ние вязкой слюны, тахикардию, коматозное состояние. Болезнь длится от 2 до 5 сут. У телят 1-2-дневного возраста болезнь про­текает наиболее остро.

По данным X. Е. Хараламбиева и Д. Белчева, ротавирусный эн­терит более типичен для телят 4-12-дневного возраста и характе­ризуется средней тяжестью течения болезни с возможным выздо­ровлением.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии обнаружива­ют язвы на слизистой оболочке ротовой полости, пищевода и две­надцатиперстной кишки. Стенки кишечника истончены, слизис­тая оболочка гиперемирована, обнаруживают геморрагии, в ки­шечнике находится жидкое желтовато-зеленое содержимое. Уста­навливают увеличение мезентериальных лимфатических узлов, иногда их дегенеративно-некротические поражения.

Отмечают петехиальные кровоизлияния под серозной оболоч­кой предсердий и точечные на селезенке, дистрофическо-некро-тические изменения в печени и почках. Иногда отмечают гипере­мию и отечность слизистой бронхов, нехарактерные изменения в легких.

При гистологическом исследовании обнаруживают некроти­ческий энтерит. Наблюдают деструкцию ворсинок тонкого ки­шечника.

Диагноз. Ставят его комплексно на основании эпизоотологи-ческих данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, но основной метод диагностики - лабораторные ис­следования, включающие методы электронной и иммуноэлект-ронной микроскопии. В лабораторию направляют не менее 10 проб жидких фекалий, взятых от 2-14-дневных телят с клини­ческими признаками диареи на 1-3-й день заболевания, а также от трупов - тонкий кишечник с содержимым (не позднее 2-3 ч с момента гибели или вынужденного убоя), 10-15 проб парных сы­вороток крови больных и переболевших животных, а также 6- 10 проб сыворотки крови и молока коров. Для вирусологических и электронно-микроскопических исследований готовят 10%-ную суспензию фекалий на растворе Хенкса.

Для индикации и идентификации ротавирусов применяют ме­тод иммуноферментного анализа, метод моноклональных антител ELISA, реакции диффузной преципитации, торможения гемаг-глютинации, непрямой и прямой иммунофлюоресценции, нейт­рализации, связывания комплемента, радиоиммунологический метод. Выявление ротавирусов в патологическом материале воз­можно также с помощью электронной и иммуноэлектронной микроскопии с сывороткой реконвалесцентов или сывороткой ла­бораторных животных (кроликов, морских свинок), иммунизиро­ванных ротавирусом обезьян SA 11.

Для экспресс-диагностики используют реакцию латекс-агглю­тинации, которая обладает высокой чувствительностью. Рота- и ко-ронавирусы крупного рогатого скота способны образовывать бляш­ки в культуре клеток, особенно при добавлении около 0,5 мкг/мл трипсина, что может быть также использовано в диагностике.

Применяют методы встречного иммуноэлектрофореза, реак­цию диффузной преципитации в агаровом геле, электрофореза РНК в полиакриловом геле, реакцию обратной пассивной гемаг-глютинации, метод иммуноагрегатной реакции агглютинации.

При диагностике ротавирусной инфекции животных и челове­ка используют реакции непрямой или торможения гемагглютина-ции и связывания комплемента с диагностикумом «Ротатест», а также полимеразную цепную реакцию.

Ретроспективная диагностика серологическими исследования­ми имеет ограниченную ценность, так как в течение первых не­дель жизни не удается обнаружить прироста титра антител, не­смотря на прошедшую болезнь. В этом случае наиболее успешно применима реакция связывания комплемента: комплементсвязы-вающие антитела отсутствуют у большинства животных в первые дни болезни, к 7-10 дню их титр в сыворотке крови возрастает, достигая максимума к 21 дню.

При постановке диагноза следует учитывать, что ротавирусная инфекция крупного рогатого скота может протекать в виде сме­шанных инфекций с участием таких возбудителей, как бычий ко-ронавирус, парвовирус крупного рогатого скота.

Дифференциальный диагноз. Необходимо исклю­чить диспепсию, корона- и парвовирусные инфекции, эшерихиоз и вирусную диарею, псевдомоноз, сальмонеллез, протейную и другие энтеробактериальные инфекции. Следует учитывать высокую вероятность смешанных инфекций (см. «Особенности разви­тия инфекционных болезней в производственных условиях»).

Лечение. Больных животных изолируют и проводят комбини­рованное лечение. Для специфической терапии применяют по­лиспецифическую гипериммунную сыворотку против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят. При ее отсутствии телятам вводят 15 см 3 сыворотки животных-до-норов (реконвалесцентов с содержанием антигемагглютининов к рота- и коронавирусам в титре 1:32-1:128) с добавлением 0,3%-ного раствора зоолана в дозе 1,4-1,6 см 3 1-2 раза в сутки. Такой спо­соб обеспечивал эффективность лечения до 100 %.

Применяют перорально смектит - гидрат силиката алюминия в виде порошка в дозе 500 мг/кг массы животного в день в течение 4 сут. Смектит предохраняет телят от диареи, вероятно, за счет ад­сорбции ротавируса и действия на прилежащий слой слизи, что обеспечивает защиту слизистой тонкого кишечника. Перорально в капсулах или с регидратационной жидкостью назначают реком-бинант 1 - гибрид интерферона из Е. coli.

Растворы электролитов без бикарбоната путем исключения за­менителя цельного молока предотвращают дальнейшее наруше­ние кислотно-щелочного равновесия (рН > 7,2).

При выявлении болезни больных животных изолируют и при­меняют противодиарейные средства: физиологический раствор (5-6 л в сутки), антибиотики (например, 10%-ный раствор байт-рила внутримышечно в дозе 1 см 3 на теленка, канамицин перо­рально по 0,5 г 1-2 раза в день), электролиты внутрь. Для симпто­матической и патогенетической терапии разработан препарат комплексного действия - антидиарин.

Терапевтический эффект получен от применения препаратов: фоспренила (из хвои сосны) - вводят в дозе 0,4 см 3 /кг внутримы­шечно двукратно на 1-й и 4-й дни лечения; гамавита, содержаще­го большой спектр аминокислот, витаминов, микроэлементов, производных нуклеиновых кислот, биогенный стимулятор - эк­стракт плаценты и иммуномодулятор - натрия нуклеинат. Его ре­комендуют вводить внутривенно в дозе 0,2 см 3 /кг также на 1-й и 4-й дни лечения.

Для вяжущего и противовоспалительного эффекта в желудочно-кишечном тракте применяют щавель конский и ромашку аптечную в виде настоя (25 г на 1 л воды) в суточном объеме 10 мл/кг массы животного в 3-4 приема в течение дня за 20 мин до кормления. Кроме того, назначают пробиотики, например ацидофиллин, био-тин, бактонеотим, биод 5 и др. Комплексное лечение проводят 3-4 дня.

Иммунитет. У коров и овец антитела к ротавирусу секретируют-ся в наибольших концентрациях в первый день и резко падают к третьему дню после рождения. Многие новорожденные живот­ные, инфицированные ротавирусом, имеют антитела, адсорбированные из молозива. Считают, что колостральный иммунитет обеспечивает устойчивость новорожденного теленка к вирусу или снижает тяжесть переболевания.

Для иммунизации животных разработаны и применяются вак­цины: ассоциированная вакцина «Ротавак К-99», «Роко-81», «Ро-ковак» (ВГНКИ), ассоциированная вакцина против рота-, коро­на-, герпесвирусной инфекций и эшерихиоза; сорбированная, инактивированная бивалентная вакцина против рота- и коронави-русной инфекций крупного рогатого скота; сорбированная, инак­тивированная вакцина ВНИИЗЖ против рота-, корона- и реови-русной инфекций крупного рогатого скота.

Профилактика и меры борьбы. Для более полного выявления инфицированных животных целесообразно проводить 1 раз в год поголовное обследование коров с целью выявления антител к ро-тавирусу и исследование сыворотки крови телят в реакции тормо­жения (непрямой) гемагтлютинации на 1-5-й дни после рожде­ния и повторно на 10-20-й дни. Исследование фекалий телят с це­лью выявления антигена ротавируса необходимо проводить с 1-го до 10-го дня жизни.

Общая основа профилактики - предупреждение стрессов. Важное значение имеет правильное и полноценное кормление ко­ров, предупреждающее нарушение обмена веществ и поддержива­ющее достаточную концентрацию каротина в плазме крови.

На комплексах необходимы профилактические обработки жи­вотных иммунной сывороткой реконвалесцентов.

Своевременное выпаивание достаточного количества молозива от коров-матерей, двукратно иммунизированных инактивирован-ной вакциной против рота- и коронавирусных инфекций, и при­менение новорожденным телятам синкогеля значительно сокра­щает заболеваемость диареей и гибель телят.

Стельных коров вакцинируют ассоциированной вакциной «Ро­тавак К-99» внутримышечно однократно вдозе 2 см 3 за 2 нед до оте­ла. Значительному повышению специфических антител в молозиве способствует двукратная вакцинация коров инактивированной вакциной «Роко-81» за 20-40 дней до отела в заднюю четверть вы­мени в дозе 2 см 3 . Титр антител 1:64 предохраняет телят от болезни.

Ассоциированную против рота- и коронавирусного энтерита телят вакцину «Роковак» (ВГНКИ) выпаивают новорожденным за 30 мин до первого приема молозива. Иммунитет наступает через несколько часов за счет образования интерферона в клетках сли­зистой кишечника и сохраняется в течение периода чувствитель­ности теленка к вирулентным штаммам.

Применяют также ассоциированную вакцину против рота-, ко­рона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят, которую вводят внутримышечно глубокостельным коровам и нетелям за 30-35 дней до отела двукратно с 14-15-дневным интервалом в дозе 10 см 3 .

В хозяйстве при ротавирусной диарее крупного рогатого скота необходимо проводить вынужденную дезинфекцию помещений растворами 10%-ного формалина, 5%-ного лизола, хлорсодержа-щими препаратами с не менее 5 % активного хлора.

Ротавирусная инфекция (лат. -Diarrhearotaviralisvitulorum,Rotavirosisingectiosabovuim; ротавирусная диарея телят) - остро протекающая болезнь телят, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, диареей и дегидратацией.

347 Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Мебус с сотр. (США) в 1969 г. выделили из фекалий больных новорожденных телят вирусный агент и воспроизвели диарею у телят-гнотобиотов, не получавших молозива. Впоследствии рота-вирусы были обнаружены у поросят, ягнят и других животных. В настоящее время рота-вирусная диарея описана в 20 странах мира и является актуальной проблемой. Могут заболевать люди.

Возбудитель болезни. Возбудитель относится к РНК-содержащим вирусам семействаReoviridae, родуRotavirus. В последний входят ротавирусы человека, коров, овец, коз, свиней, обезьян, лошадей, оленей, кроликов, уток. Установлена общность группоспецифических и типоспецифических антигенов ротавирусов телят и человека, а также групповых антигенов вируса телят, мышей и человека. Ротавирусы крупного рогатого скота, свиней, лошадей и кроликов также родственны. Известно три серотипа возбудителя.

Для культивирования ротавируса используют первично трипсинизиро-ванные культуры клеток, цитопатогенное действие вируса проявляется через различное число пассажей.

Ротавирусы крупного рогатого скота устойчивы к воздействию физических и химических факторов, в частности к колебаниям рН от 3,0 до 5,0, действию концентрированных солей, жирорастворителей, ферментов желудка и сычуга. Вирус сохраняется в фекалиях до 9 мес, при температуре -60 °С - в течение нескольких месяцев, при 4 "С - не менее 1 мес. При 50 °С ротавирус интактивируется в течение 1 ч.

Губительно воздействуют на вирус хлор, диоксид хлора, монохлор-амин, а также 10%-ный раствор формалина, 5%-ный раствор лизола при экспозиции 2 ч.

Эпизоотология. К ротавирусной диарее восприимчивы животные разных видов. Чаще болеют телята 2...3-дневного возраста в зимне-осенний и весенний периоды. Заболеваемость достигает 100 %, летальность - 50 %. Отмечена прямая связь между заболеванием новорожденных телят диареей и присутствием в их фекалиях ротавируса, который обнаружен у 19,1...45,2 % телят в возрасте до 12 дней.

Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с каловыми массами. Важный аспект при распространении - возможность скрытого течения болезни. В распространении болезни немаловажную роль играют дикие животные, собаки, кошки, а также животные со скрытым течением болезни. В сохранении вируса в стаде имеет значение повторное инфицирование взрослых особей от молодняка.

Заражение телят происходит алиментарно после рождения. Имеются сообщения, что ротавирусы могут проходить через плаценту и инфицировать плод.

Биологическая особенность возбудителя - поражение гетерологичных хозяев. Ротавирусы телят вызывают диарею у поросят; ротавирусы жеребят и ягнят также репродуцируются у свиней, которые, в свою очередь, могут заражать телят; ротавирусы крыс поражают людей; ротавирусы человека - телят, поросят, щенков. Антитела к ротавирусу телят обнаружены в сыворотке крови собак, лошадей и кошек.

Патогенез. Ротавирус репродуцируется и поражает эпителиальные клетки апикальной части ворсинок тонкого отдела кишечника и мезентериальные лимфатические узлы, вызывая вакуолизацию и преждевременное слущивание, что приводит к укорачиванию ворси-

348нок кишечника и покрытию их незрелым кубическим эпителием. Всасывающая функция ворсинок частично или полностью прекращается. Незрелые клетки эпителия ослабляют глюкозосвязанный транспорт натрия, что способствует развитию острой диареи и часто приводит к летальному исходу.

Пораженные вирусом эпителиальные клетки выделяются с фекалиями в первые 4...5 ч после начала диарейного синдрома. Антитела, продуцируемые слизистой оболочкой кишечника, появляются между 3-м и 12-м днем, а в фекалиях - между 4-м и 18-м днем после заражения телят.

Течение и клиническое проявление. Инкубационный период длится 16...24 ч. На степень тяжести болезни могут влиять различные факторы: вирулентность и доза вируса, возраст телят, иммунный статус молодняка, сопутствующие инфекции (эшерихиоз, протейная инфекция и др.).

Течение болезни острое. Симптомы проявляются выделением водянистых фекалий желтоватого цвета с кисловатым запахом. Температура тела, как правило, нормальная, иногда поднимается до 41 "С, аппетит несколько снижен. Телята угнетены, отказываются от воды, у них отмечают атаксию, депрессию.

При развитии болезни фекалии становятся грязно-желтого цвета, а в дальнейшем - с примесью крови. Отмечают западание глаз, дегидратацию и фибрилляцию мышц конечностей, истечение вязкой слюны, тахикардию, коматозное состояние. Болезнь длится от 2 до 5 сут. У телят 1...2-дневного возраста болезнь протекает наиболее остро.

Патологоанатомические признаки. При вскрытии обнаруживают язвы на слизистой оболочке ротовой полости, пищевода и двенадцатиперстной кишки. Стенки кишечника истончены, слизистая оболочка гипере-мирована, обнаруживают геморрагии, кишечник заполнен жидким жел-товато-зеленым содержимым. Устанавливают увеличение мезентериаль-ных лимфатических узлов, иногда их дегенеративно-некротические поражения.

Отмечают петехиальные кровоизлияния под серозной оболочкой предсердий и точечные на селезенке, дистрофическо-некротические изменения в печени и почках. Иногда отмечают гиперемию и отечность слизистой оболочки бронхов, нехарактерные изменения в легких.

При гистологическом исследовании обнаруживают некротический энтерит и деструкцию ворсинок тонкого кишечника.

Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, но основной метод диагностики-лабораторные исследования, включающие методы электронной и иммуноэлектронной микроскопии.

В лабораторию направляют не менее 10 проб жидких фекалий, взятых от 2... 14-дневных телят с клиническими признаками диареи на 1...3-Й день заболевания, а также от трупов - тонкий кишечник с содержимым, пробы парных сывороток крови больных и переболевших животных, а также пробы сыворотки крови и молока коров.

Для индикации и идентификации ротавирусов применяют методы ИФА, метод моноклональных антител в ИФА, РДП, РТГА, РИФ, РН, РСК, радиоиммунологический метод. Выявление ротавирусов в патологическом материале возможно также при помощи электронной и иммуноэлектронной микроскопии со специфической сывороткой и другими методами.

Для экспресс-диагностики используют реакцию латекс-агглютинации, реакции непрямой гемагглютинации или торможения гемагглютинации и

349связывания комплемента с диагностикумом «Ротатест», а также полиме-разную цепную реакцию.

Ретроспективная диагностика при помощи серологических исследований имеет ограниченную ценность, так как в первые недели жизни не удается обнаружить прироста титра антител, несмотря на перенесенную болезнь.

При постановке диагноза следует учитывать, что ротавирусная инфекция крупного рогатого скота может протекать в виде смешанных инфекций с участием таких возбудителей, как бычий коронавирус, парвовирус крупного рогатого скота.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить корона- и парвовирусные инфекции, эшерихиоз и вирусную диарею, псевдомоноз, сальмонеллез, протейную и другие энтеробактери-альные инфекции; различные диареи неинфекционного характера. Следует учитывать высокую вероятность смешанных инфекций.

Иммунитет, специфическая профилактика. У новорожденных животных антитела к ротавирусу секретируются в наибольших концентрациях в 1 -й день и резко падают к 3-му дню после рождения. Многие из них имеют антитела, адсорбированные из молозива. Считают, что колостральный иммунитет обеспечивает устойчивость новорожденного теленка к вирусу или снижает тяжесть переболевания.

Для иммунизации животных разработаны и применяются вакцины: ассоциированная вакцина «Ротавак К-99», «Роко-81», «Роковак» (ВГНКИ), ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной инфекций и эшерихиоза; бивалентная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота сорбированная инактивированная, вакцина ВНИИЗЖ против рота-, корона- и реовирусной инфекций крупного рогатого скота сорбированная инактивированная.

Профилактика и меры борьбы. Для более полного выявления инфицированных животных целесообразно проводить 1 раз в год поголовное обследование коров с целью обнаружения антител к ротавирусу и исследование сыворотки крови телят в реакции торможения (непрямой) гемаг-глютинации на 1...5-Й день после рождения и повторно на 10...20-й день. Исследование фекалий телят с целью выявления антигена ротавируса необходимо проводить с 1-го до 10-го дня жизни.

Общая основа профилактики - предупреждение стрессов. Важное значение имеет правильное и полноценное кормление коров, обеспечивающее нормальный обмен веществ и поддерживающее достаточную концентрацию каротина в плазме крови.

На комплексах необходимо проведение профилактической обработки животных иммунной сывороткой реконвалесцентов. Своевременное выпаивание достаточного количества молозива от коров-матерей, двукратно иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и корона-вирусных инфекций, и применение новорожденным телятам синкогеля значительно сокращают заболеваемость диареей и гибель телят.

Стельных коров вакцинируют одной из выпускаемых промышленностью вакцин. Новорожденным выпаивают ассоциированную вакцину (ВГНКИ) против рота- и коронавирусного энтерита телят за 30 мин до первого приема молозива.

В хозяйстве при ротавирусной диарее крупного рогатого скота необходимо проведение вынужденной дезинфекции помещений растворами формалина, лизола, хлорсодержащими препаратами.

350Лечение. Больных животных изолируют и проводят комбинированное лечение. Для специфической терапии применяют полиспецифическую гипериммунную сыворотку против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят. При ее отсутствии телятам вводят сыворотку животных-реконвалесцентов (доноров). Эффективность такого лечения достигала 100 %.

Применяют перорально смектит - гидрат силиката алюминия в виде порошка. Перорально в капсулах или с регидратационной жидкостью назначают рекомбинант 1 - гибрид интерферона из Е. coli. Исключив из рациона заменители цельного молока и вводя растворы электролитов без бикарбоната натрия, удается предотвратить дальнейшее нарушение кис-лотно-щелочного равновесия.

При выявлении болезни больных животных изолируют и применяют противодиарейные средства: физиологический раствор, антибиотики (например, раствор байтрила, канамицин), электролиты внутрь. Для симптоматической и патогенетической терапии разработан препарат комплексного действия - антидиарин.

Терапевтический эффект получен от применения таких препаратов, как фоспренил, нуклеинат натрия, гамавит и др.

Вяжущее и противовоспалительное действие в желудочно-кишечном тракте оказывают настои щавеля конского и ромашки аптечной. Кроме того, назначают пробиотики, например ацидофиллин, биотин, бактонео-тим, биод 5 и др. Комплексное лечение проводят 3...4 дня.

Кон трольные вопросы и задания. 1. Охарактеризуйте эпизоотологический процесс при данной болезни. 2. Каковы клинические признаки и патологоанатомические изменения при ротавирусной инфекции телят? 3. Когда диагноз на ротавирусную инфекцию считают установленным и от каких болезней следует ее дифференцировать? 4. Назовите основные принципы лечения и специфические средства профилактики. 5. Охарактеризуйте основные меры борьбы и профилактики ротавирусной инфекции телят.

Ротавирусная инфекция (лат. - Diarrhea rotaviralis vitulorum, Rotavirosis ingectiosa bovuim; ротавирусная диарея телят) - остро протекающая болезнь телят, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, диареей и дегидратацией.

Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Мебус с сотр. (США) в 1969 г. выделили из фекалий больных новорожденных телят вирусный агент и воспроизвели диарею у телят-гнотобиотов, не получавших молозива. Впоследствии рота-вирусы были обнаружены у поросят, ягнят и других животных. В настоящее время рота-вирусная диарея описана в 20 странах мира и является актуальной проблемой. Могут заболевать люди.

Возбудитель болезни. Возбудитель относится к РНК-содержащим вирусам семейства Reoviridae, роду Rotavirus. В последний входят ротавирусы человека, коров, овец, коз, свиней, обезьян, лошадей, оленей, кроликов, уток. Установлена общность группоспецифических и типоспецифических антигенов ротавирусов телят и человека, а также групповых антигенов вируса телят, мышей и человека. Ротавирусы крупного рогатого скота, свиней, лошадей и кроликов также родственны. Известно три серотипа возбудителя.

Для культивирования ротавируса используют первично трипсинизиро-ванные культуры клеток, цитопатогенное действие вируса проявляется через различное число пассажей.

Ротавирусы крупного рогатого скота устойчивы к воздействию физических и химических факторов, в частности к колебаниям рН от 3,0 до 5,0, действию концентрированных солей, жирорастворителей, ферментов желудка и сычуга. Вирус сохраняется в фекалиях до 9 мес, при температуре -60 °С - в течение нескольких месяцев, при 4 "С - не менее 1 мес. При 50 °С ротавирус интактивируется в течение 1 ч.

Губительно воздействуют на вирус хлор, диоксид хлора, монохлор-амин, а также 10%-ный раствор формалина, 5%-ный раствор лизола при экспозиции 2 ч.

Эпизоотология. К ротавирусной диарее восприимчивы животные разных видов. Чаще болеют телята 2...3-дневного возраста в зимне-осенний и весенний периоды. Заболеваемость достигает 100 %, летальность - 50 %. Отмечена прямая связь между заболеванием новорожденных телят диареей и присутствием в их фекалиях ротавируса, который обнаружен у 19,1...45,2 % телят в возрасте до 12 дней.

Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с каловыми массами. Важный аспект при распространении - возможность скрытого течения болезни. В распространении болезни немаловажную роль играют дикие животные, собаки, кошки, а также животные со скрытым течением болезни. В сохранении вируса в стаде имеет значение повторное инфицирование взрослых особей от молодняка.

Заражение телят происходит алиментарно после рождения. Имеются сообщения, что ротавирусы могут проходить через плаценту и инфицировать плод.

Биологическая особенность возбудителя - поражение гетерологичных хозяев. Ротавирусы телят вызывают диарею у поросят; ротавирусы жеребят и ягнят также репродуцируются у свиней, которые, в свою очередь, могут заражать телят; ротавирусы крыс поражают людей; ротавирусы человека - телят, поросят, щенков. Антитела к ротавирусу телят обнаружены в сыворотке крови собак, лошадей и кошек.

Патогенез. Ротавирус репродуцируется и поражает эпителиальные клетки апикальной части ворсинок тонкого отдела кишечника и мезентериальные лимфатические узлы, вызывая вакуолизацию и преждевременное слущивание, что приводит к укорачиванию ворси-

Нок кишечника и покрытию их незрелым кубическим эпителием. Всасывающая функция ворсинок частично или полностью прекращается. Незрелые клетки эпителия ослабляют глюкозосвязанный транспорт натрия, что способствует развитию острой диареи и часто приводит к летальному исходу.

Пораженные вирусом эпителиальные клетки выделяются с фекалиями в первые 4...5 ч после начала диарейного синдрома. Антитела, продуцируемые слизистой оболочкой кишечника, появляются между 3-м и 12-м днем, а в фекалиях - между 4-м и 18-м днем после заражения телят.

Течение и клиническое проявление. Инкубационный период длится 16...24 ч. На степень тяжести болезни могут влиять различные факторы: вирулентность и доза вируса, возраст телят, иммунный статус молодняка, сопутствующие инфекции (эшерихиоз, протейная инфекция и др.).

Течение болезни острое. Симптомы проявляются выделением водянистых фекалий желтоватого цвета с кисловатым запахом. Температура тела, как правило, нормальная, иногда поднимается до 41 "С, аппетит несколько снижен. Телята угнетены, отказываются от воды, у них отмечают атаксию, депрессию.

При развитии болезни фекалии становятся грязно-желтого цвета, а в дальнейшем - с примесью крови. Отмечают западание глаз, дегидратацию и фибрилляцию мышц конечностей, истечение вязкой слюны, тахикардию, коматозное состояние. Болезнь длится от 2 до 5 сут. У телят 1...2-дневного возраста болезнь протекает наиболее остро.

Патологоанатомические признаки. При вскрытии обнаруживают язвы на слизистой оболочке ротовой полости, пищевода и двенадцатиперстной кишки. Стенки кишечника истончены, слизистая оболочка гипере-мирована, обнаруживают геморрагии, кишечник заполнен жидким жел-товато-зеленым содержимым. Устанавливают увеличение мезентериаль-ных лимфатических узлов, иногда их дегенеративно-некротические поражения.

Отмечают петехиальные кровоизлияния под серозной оболочкой предсердий и точечные на селезенке, дистрофическо-некротические изменения в печени и почках. Иногда отмечают гиперемию и отечность слизистой оболочки бронхов, нехарактерные изменения в легких.

При гистологическом исследовании обнаруживают некротический энтерит и деструкцию ворсинок тонкого кишечника.

Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, но основной метод диагностики-лабораторные исследования, включающие методы электронной и иммуноэлектронной микроскопии.

В лабораторию направляют не менее 10 проб жидких фекалий, взятых от 2... 14-дневных телят с клиническими признаками диареи на 1...3-Й день заболевания, а также от трупов - тонкий кишечник с содержимым, пробы парных сывороток крови больных и переболевших животных, а также пробы сыворотки крови и молока коров.

Для индикации и идентификации ротавирусов применяют методы ИФА, метод моноклональных антител в ИФА, РДП, РТГА, РИФ, РН, РСК, радиоиммунологический метод. Выявление ротавирусов в патологическом материале возможно также при помощи электронной и иммуноэлектронной микроскопии со специфической сывороткой и другими методами.

Для экспресс-диагностики используют реакцию латекс-агглютинации, реакции непрямой гемагглютинации или торможения гемагглютинации и

Связывания комплемента с диагностикумом «Ротатест», а также полиме-разную цепную реакцию.

Ретроспективная диагностика при помощи серологических исследований имеет ограниченную ценность, так как в первые недели жизни не удается обнаружить прироста титра антител, несмотря на перенесенную болезнь.

При постановке диагноза следует учитывать, что ротавирусная инфекция крупного рогатого скота может протекать в виде смешанных инфекций с участием таких возбудителей, как бычий коронавирус, парвовирус крупного рогатого скота.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить корона- и парвовирусные инфекции, эшерихиоз и вирусную диарею, псевдомоноз, сальмонеллез, протейную и другие энтеробактери-альные инфекции; различные диареи неинфекционного характера. Следует учитывать высокую вероятность смешанных инфекций.

Иммунитет, специфическая профилактика. У новорожденных животных антитела к ротавирусу секретируются в наибольших концентрациях в 1 -й день и резко падают к 3-му дню после рождения. Многие из них имеют антитела, адсорбированные из молозива. Считают, что колостральный иммунитет обеспечивает устойчивость новорожденного теленка к вирусу или снижает тяжесть переболевания.

Для иммунизации животных разработаны и применяются вакцины: ассоциированная вакцина «Ротавак К-99», «Роко-81», «Роковак» (ВГНКИ), ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной инфекций и эшерихиоза; бивалентная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота сорбированная инактивированная, вакцина ВНИИЗЖ против рота-, корона- и реовирусной инфекций крупного рогатого скота сорбированная инактивированная.

Профилактика и меры борьбы. Для более полного выявления инфицированных животных целесообразно проводить 1 раз в год поголовное обследование коров с целью обнаружения антител к ротавирусу и исследование сыворотки крови телят в реакции торможения (непрямой) гемаг-глютинации на 1...5-Й день после рождения и повторно на 10...20-й день. Исследование фекалий телят с целью выявления антигена ротавируса необходимо проводить с 1-го до 10-го дня жизни.

Общая основа профилактики - предупреждение стрессов. Важное значение имеет правильное и полноценное кормление коров, обеспечивающее нормальный обмен веществ и поддерживающее достаточную концентрацию каротина в плазме крови.

На комплексах необходимо проведение профилактической обработки животных иммунной сывороткой реконвалесцентов. Своевременное выпаивание достаточного количества молозива от коров-матерей, двукратно иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и корона-вирусных инфекций, и применение новорожденным телятам синкогеля значительно сокращают заболеваемость диареей и гибель телят.

Стельных коров вакцинируют одной из выпускаемых промышленностью вакцин. Новорожденным выпаивают ассоциированную вакцину (ВГНКИ) против рота- и коронавирусного энтерита телят за 30 мин до первого приема молозива.

В хозяйстве при ротавирусной диарее крупного рогатого скота необходимо проведение вынужденной дезинфекции помещений растворами формалина, лизола, хлорсодержащими препаратами.

Лечение. Больных животных изолируют и проводят комбинированное лечение. Для специфической терапии применяют полиспецифическую гипериммунную сыворотку против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят. При ее отсутствии телятам вводят сыворотку животных-реконвалесцентов (доноров). Эффективность такого лечения достигала 100 %.

Применяют перорально смектит - гидрат силиката алюминия в виде порошка. Перорально в капсулах или с регидратационной жидкостью назначают рекомбинант 1 - гибрид интерферона из Е. coli. Исключив из рациона заменители цельного молока и вводя растворы электролитов без бикарбоната натрия, удается предотвратить дальнейшее нарушение кис-лотно-щелочного равновесия.

При выявлении болезни больных животных изолируют и применяют противодиарейные средства: физиологический раствор, антибиотики (например, раствор байтрила, канамицин), электролиты внутрь. Для симптоматической и патогенетической терапии разработан препарат комплексного действия - антидиарин.

Терапевтический эффект получен от применения таких препаратов, как фоспренил, нуклеинат натрия, гамавит и др.

Вяжущее и противовоспалительное действие в желудочно-кишечном тракте оказывают настои щавеля конского и ромашки аптечной. Кроме того, назначают пробиотики, например ацидофиллин, биотин, бактонео-тим, биод 5 и др. Комплексное лечение проводят 3...4 дня.

Контрольные вопросы и задания. 1. Охарактеризуйте эпизоотологический процесс при данной болезни. 2. Каковы клинические признаки и патологоанатомические изменения при ротавирусной инфекции телят? 3. Когда диагноз на ротавирусную инфекцию считают установленным и от каких болезней следует ее дифференцировать? 4. Назовите основные принципы лечения и специфические средства профилактики. 5. Охарактеризуйте основные меры борьбы и профилактики ротавирусной инфекции телят.

Ротавирусная диарея (Bovine rotaviral infections, синоним - диарея неонатальных телят) - остропротекающая, контагиозная болезнь телят периода новорожденное™, характеризующаяся воспалением слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта и проявляющаяся развитием диареи, явлениями обезвоживания организма.

Заболевание имеет широкое распространение во многих странах. Она была установлена везде, где проводили исследования. Имеются данные о широком распространении ротавируса телят среди разных видов животных, а антитела против вируса обнаружены у морских свинок, крыс, хомяков, мышей.

Возбудитель и его свойства. Международный комитет по таксономии в 1978 г. РНК-содержащий, гемагглютинирующий ротавирус телят отнес к семейству Reoviridae, роду Rotavirus.

Впервые вирус был выделен от телят С.A. Mebus et al. (1969). Вирионы колесообразной формы размером от 55 до 65 нм покрыты полипетидом. Обнаружено 3 серологических типа вируса, которые имеют антигенное родство с ротавирусами, выделенными от детей раннего возраста. Вирус локализуется в тонком отделе кишечника, в легких и мезентериальных лимфатических узлах. Успешно репродуцируется в клетках трахеи эмбрионов коров, в перевиваемой культуре клеток почки телят, вызывая специфический цитопатический эффект через 3-7 дней после заражения.

Вирус устойчив к хлороформу, эфиру, фреону и кислой среде (рН 3-4). При 4 °С сохраняется" до 30 дней, при 50 °С погибает за 1 час; 10%-ный раствор формальдегида, 5%-ный раствор лизола убивают вирус за 2 часа.

Патогенез. Вирус, размножаясь в дифференцированных эпителиальных клетках апикальной части ворсинок тонкого отдела кишечника вызывает ускоренную миграцию и преждевременное слущивание энтероцитов, и эти энтероциты заменяются незрелыми клетками, неспособными осуществлять функцию всасывания. В результате в кишечнике накапливается большое количество жидкости, способствующей развитию профузного рецидивирующего поноса. Происходит нарушение водно-солевого, белкового и других форм обмена веществ, в просвете кишечника начинают интенсивно размножаться гнилостные микроорганизмы, которые своими протеолитическими ферментами вызывают повреждения слизистой оболочки, а выделяемыми токсинами - токсикоз.

Эпизоотология. Болеют телята первых дней жизни. Источником возбудителя являются больные телята и клинически здоровые животные-вирусоносители. Антитела против ротавируса телят обнаруживаются в крови собак, кошек, поросят, жеребят, крыс и мышей, что указывает на возможную циркуляцию этого возбудителя среди других видов животных.

Телята заражаются вирусом вскоре после рождения алиментарным путем. Факторами передачи возбудителя являются все объекты окружающей среды, загрязненные фекалиями больных и животных-вирусоносителей, в том числе и молоко коров. Заболеваемость может достигать 90%, смертность - от 5 до 25%. Болезнь чаще регистрируется в зимнее время и весной. У переболевших телят вирус сохраняется в кишечнике до 10 суток.

Признаки болезни. При экспериментальном пероральном заражении телят, не получавших молозиво, инкубационный период длится 12-24 час. Как у экспериментально зараженных, так и у заразившихся в естественных условиях телят болезнь проявляется диареей, прогрессирующим обезвоживанием организма и слабостью. У заболевших иногда повышается температура тела др 41 °С. Ротавирусная инфекция практически всегда осложняется эшерихиями, вследствие чего смерхность резко возрастает.

Патологоанатомические изменения. Основные изменения в виде катарально-геморрагического воспаления слизистой оболочки локализуются в тонком отделе кишечника. Ворсинки кишечника в отдельных участках полностью исчезают, эпителиальные клетки принимают кубическую форму.

Диагностика. Диагноз основывается на обнаружении вируса или вирусного антигена в фекалиях и в толще слизистой оболочки тонкого отдела кишечника павших телят, а также на выявлении антител к вирусу в сыворотках крови больных и переболевших телят, в крови и в молозиве коров.

В лабораторию направляют не менее 10 проб жидких фекалий от больных телят, перевязанные участки тонкого отдела кишечника с содержимым и 10-15 проб сывороток крови больных и переболевших телят, коров и молозива коров.

Для обнаружения вируса в патологическом материале применяют электронную микроскопию, метод флюоресцирующих антител, заражение культуры клеток и реакцию преципитации в геле агарозы. В нашей стране разработан иммуноферментный метод диагностики.

Антитела в сыворотках крови и молозиве обнаруживают в РСК. РПГА и др. серологических реакциях.

Ротавирусную диарею телят дифференцируют от короновирусной инфекции и эшерихиоза проведением соответствующих исследований.

Лечение. Больных лечат, как и при эшерихиозе, - назначают антибиотики широкого спектра действия, сульфаниламиды и нитрофураны.

Профилактика. В хозяйствах осуществляют комплекс мероприятий, изложенных в разделе 1.5. Кроме того, всех стельных коров за 2-3 недели до ожидаемого отела вакцинируют инактивированной вакциной. Например, во Франции используют комбинированную бета-пропиолактоновую вакцину против рота- и короновирусной инфекции, в Болгарии - бивалентную вакцину против этих двух инфекций из местных штаммов.

Инфекционные болезни животных раннего постнатального периода / Воронин Е.С., Девришов Д.А., Есепенок В.А., Сидоров М.А., Федоров Ю.Н., Юров К.П

Ротавирусная инфекция телят (rotaviridae infection bovinum ) – остро протекающее, высококонтагиозное заболевание новорожденных телят, выделяющееся профузным поносом, обезвоживанием организма, формированием катарального либо катарально-геморрагического гастроэнтерита и значительной смертностью.

Этиология . Возбудитель ротавирусной инфекции телят принадлежит к семейству Reoviridae, роду Rotavirus. Все ротавирусы по строению идентичны и обладают общим внутренним антигеном, выявленным в РСК, РИФ, РИД и ИФА.

Полные вирионы обладают правильной сферической архитектоникой, сходную с формой колеса. Данная форма зрелых вирионов представляет собой особенность ротавирусов, дозволяющая различать их от энтеровирусов.

Эпизоотологические данные . В естественных условиях заболевают новорожденные телята в возрасте от 2 до 12 суток, однако очень часто в первые 2-6 суток жизни, когда заболеваемость составляет 75,5-100%, при 30%-ной смертности. Наиболее подвержены болезни телочки (45,5%), чем бычки (32,0%). У взрослых животных болезнь проходит без симптомов и сопутствуется продолжительным выделением возбудителя во внешнюю среду.

Источник возбудителя ротавирусной инфекции телят - нездоровые и переболевшие животные, выделяющие вирус во внешнюю среду с фекалиями. В одном мл фекалий нездорового теленка способно содержаться до одного млрд. вирионов.

Установлена продолжительная персистенция вируса у лактирующих коров, что доказывается присутствием специфических антител у 95% осмотренных животных. Это свидетельствует о широком вирусоносительстве.

Обстоятельствами передачи возбудителя способна стать посуда, а также станки, вещи ухода, спецодежда, руки обслуживающего персонала, заражённые выделениями нездоровых животных. Инфицирование случается алиментарным путем и внутри утробы матери. В распространении инфекционного заболевания существенное значение могут играть собаки и кошки. Определено близкое родство ротавирусов крыс и людей к штамму бычьего ротавируса группы В.

Протекание и признаки . Инкубационный этап у телят колеблется от 12-18 часов до 2-суток. Протекание заболевания сверхострое и острое. Она длится от 2 до 5 дней и проявляется профузным поносом, общей депрессией, отказом от корма, небольшим, кратковременным увеличением температуры тела.

При этих признаках испражнения водянистые, соломенно-желтого цвета, изредка со слизью, кислого запаха. Усиленно формируется дегидратация организма и депрессия, дегенерация мышечной ткани и западение глаз. Определено, что чем моложе теленок, тем дольше время диареи. Наибольшее число вирионов (десять частиц/мл) в фекалиях заболевших телят хранится в начале заболевания, а с 5-6-го дня их число падает.

У 4-14-дневных телят ротавирусная инфекция способно осложняться коронавирусным энтеритом и эшерихиозом. В данном случае заболевание проходит тяжело и заканчивается смертью.

При вскрытии главные патологоанатомические изменения у павших телят выявляют в тонком кишечнике в виде катарального либо катарально-геморрагического воспаления. Стенка кишечника истончена, слизистая оболочка гиперемирована.

В кишечнике - жидкое желтовато-зеленое содержимое, в сычуге - сгустки молока и молозива. Фиксируют петехиальные кровоизлияния под серозной оболочкой предсердий и точечные – на селезенке, а также гиперплазию брыжеечных лимфатических узлов, атрофию лимфофолликулов. При гистологическом изучении выявляют некротический энтерит.

Диагноз на ротавирусную инфекцию . При диагностике придают значение широкому диапазону показателей: эпизоотологические данные, клинические симптомы заболевания, патологоанатомические трансформации с непременным проведением вирусологических и иммунологических изучений.

Лабораторная диагностика ротавирусной инфекции новорожденных телят организована на выявлении специфических антигенов в отправном вируссодержащем материале с употреблением реакции иммунодиффузии (РИД), иммуноферментном анализе (ИФА), иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноэлектронной микроскопии. Определение присутствия антиротавирусных глобулинов в сыворотке крови нездоровых и перенесших заболевание телят, а также в крови и молозиве коров производится с целью оценки иммунного статуса организма телят и исследования эпизоотической ситуации.

Дифференциальный диагноз . Ротавирусную инфекцию отличают от вирусной диареи, парвовирусной и коронавирусной инфекции, хламидиоза, колибактериоза.

Лечение . Для лечения применяют гипериммунные сыворотки и сыворотки реконвалесцентов, в которых существуют антитела к ротавирусу в то же время с антибактериальными и иммуностимулирующими препаратами, пробиотики. Используют также симптоматические методы лечения.

Предупреждение и меры борьбы . Для предупреждения применяют живые и инактивированные моно- и ассоциированные вакцины, гипериммунные сыворотки. Для устранения болезни применяют общие противоэпизоотические процедуры – ограниченность движения скота, обеззараживание, помещение на карантин нездоровых животных, выполнение принципа пусто-занято.